磁珠富集法筛选白鲢的微卫星分子标记

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通过磁珠富集法筛选白鲢(Hypophthalmichtysmolitrix)的微卫星分子标记。从血液中提取白鲢大片段基因组DNA,限制性内切酶Sau3AI部分消化,使大部分片段介于400~900bp,低熔点琼脂糖凝胶回收。在筛选的基因组片段上连接1个20bp的双链接头,构建白鲢全基因组PCR文库,用生物素标记的微卫星探针(CA)15进行筛选,磁珠富集含有微卫星序列的DNA片段,获得含有微卫星的单链序列;将这些序列通过PCR扩增,连接pGEM-T载体,转化入感受态大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α,得到一个微卫星序列文库;又经同位素标记的微卫星探针(CA)15进行第2次筛选,获得149个阳性克隆,经测序分析,获得微卫星序列138个,这可用引物设计软件PrimerPremier5.0设计引物81对。
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