【摘 要】
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目的 构建结核分枝杆菌Rv3914蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原.方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3914基因片段,
【机 构】
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临沂市胸科医院,山东临沂,276034;上海交通大学医学院;湖北省武汉工业学院
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目的 构建结核分枝杆菌Rv3914蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原.方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3914基因片段,插入到pET-28b(+)载体中,构建pET28 b-Rv3914重组质粒,转化大肠埃希菌E.coli BL21 plysS(DE3),经IPTG诱导表达后,应用Ni-NTA亲和柱纯化重组蛋白.结果 PCR扩增出Rv3914基因序列,重组质粒经测序并经BLAST分析后发现无点突变.pET28b-Rv3914重组质粒在大肠埃希菌E.coli BL21 plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,重组蛋白占细胞蛋白总表达量的30％以上,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度超过90％、相对分子质量约为14.7×103的目的蛋白质.结论 高纯度结核分枝杆菌Rv3914重组蛋白的获得为研究结核互补特异性抗原组合在结核病血清诊断中的价值奠定了基础.
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