【摘 要】
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目的:通过观察补阳还五汤调节沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）/p53通路发挥对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠的神经保护作用,探讨其治疗DPN的机制和方中黄芪用量。方法:90只SD大鼠随机分为正常组,模型组,DPN加含120 g黄芪的补阳还五汤组（BYHW120组）,DPN加含60 g黄芪的补阳还五汤组（BYHW60组）,DPN加含30 g黄芪的补阳还五汤组（BYHW30组）,DPN加α-
【机 构】
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河北中医学院中西医结合学院河北省中西医结合肝肾病证重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金项目（81803922）； 河北省中医药管理局中医药科研计划项目（2020150）；
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目的:通过观察补阳还五汤调节沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）/p53通路发挥对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠的神经保护作用,探讨其治疗DPN的机制和方中黄芪用量。方法:90只SD大鼠随机分为正常组,模型组,DPN加含120 g黄芪的补阳还五汤组（BYHW120组）,DPN加含60 g黄芪的补阳还五汤组（BYHW60组）,DPN加含30 g黄芪的补阳还五汤组（BYHW30组）,DPN加α-硫辛酸组（ALA组）。除正常组外,其余各组大鼠均用高糖高脂饲料和腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病。各用药干预组分别给与相应药物持续干预12周,剂量依次为含120 g黄芪的补阳还五汤15g·kg-1·d-1,含60 g黄芪的补阳还五汤8.75 g·kg-1·d-1,含30 g黄芪的补阳还五汤5.625 g·kg-1·d-1;α-硫辛酸60 mg·kg-1·d-1。正常组给予标准饮食。干预结束后检测机械性痛阈和神经传导速度;取L4-5背根神经节,苏木素-伊红（HE）染色、甲苯胺蓝染色观察病理形态改变,原位末端标记法（TUNEL）染色观察神经细胞凋亡情况;免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,SIRT1/p53通路中主要蛋白SIRT1,乙酰化的p53（acetyl-p53）,线粒体相关动力蛋白1（Drp1）,B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达。结果:与正常组比较,模型组血糖显著升高（P<0.01）,神经传导速度、机械性痛阈均显著降低（P<0.01）,TUNEL染色阳性细胞百分比,cleaved Caspase-3表达显著升高（P<0.01）,SIRT1表达显著降低（P<0.01）,acetyl-p53,Drp1,Bax/Bcl-2均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各用药干预组cleaved Caspase-3,acetyl-p53,Drp1,Bax/Bcl-2均显著降低（P<0.01）;除BYHW30组外,其余用药干预组神经传导速度、机械性痛阈明显升高（P<0.05,P<0.01）,TUNEL染色阳性细胞百分比明显升高（P<0.05,P<0.01）;BYHW120组,ALA组SIRT1表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。与BYHW120组比较,BYHW60组,BYHW30组的感觉神经传导速度、机械性痛阈及SIRT1表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,cleaved Caspase-3表达显著升高（P<0.01）;BYHW30组TUNEL染色阳性细胞百分比,acetyl-p53表达显著升高（P<0.01）。结论:补阳还五汤通过调节SIRT1/p53抑制细胞凋亡,治疗DPN。其治疗作用与方中黄芪的用量有一定关系,120 g黄芪剂量的补阳还五汤抑制p53依赖的细胞凋亡的作用较60 g和30 g黄芪剂量补阳还五汤更明显。
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