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近年来原位杂交技术日趋常用。制备探针之前先将外源CDNA（目的基因）重组于质粒载体上。重组时用一或Th个限制性内切酶将外源CDNA插入质检载体的多克隆位点上备用。使用探针时进行质粒的转化、扩增、抽提并进行检测以确保外源。DNA的存在，这是制备探针的关键性步骤。最简单的检测方法是用重组时多克隆位点的酶进行酶切后，电泳时应出现二条带即质粒本身的DNA片断带和外源CDNA片段带，若因温度或其它因素的干扰不出现二条带时，提示可能是外源出DNA已丢失，仅留下单一的质粒带，但是否真的丢失了呢？尚需检测。我们在出现此情