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探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA (shRNA)靶向沉默同源盒A10(HOXA10)基因对白血病NB4细胞增殖、凋亡和耐药的影响。
方法将NB4细胞分为干扰(lenti-shHOXA10)组、阴性对照组和未处理组,用慢病毒感染NB4细胞5 d后进行相关实验。运用流式细胞仪测定慢病毒对NB4细胞的感染效率。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)测定慢病毒干扰载体对HOXA10基因的沉默作用;MTT法检测细胞的增殖抑制情况。流式细胞术检测3组细胞凋亡率的变化,Western blot方法测定干扰HOXA10基因对多药耐药1(MDR-1)蛋白的影响。
结果慢病毒对NB4细胞的感染率达90%左右。干扰组HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平均较对照组下降,干扰组细胞抑制率和凋亡率分别为(52.12±4.02)%、(30.0±2.7)%,与阴性对照组和未处理组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示干扰HOXA10基因的表达能降低MDR-1基因的表达水平,逆转白血病细胞耐药。
结论慢病毒载体靶向干扰HOXA10基因的表达,能有效抑制NB4细胞增殖和促进其凋亡,逆转白血病细胞耐药。HOXA10基因有望成为逆转白血病耐药的新靶点。