【摘 要】
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目的 : 构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)第60-80位氨基酸多肽缺失核蛋白的真核表达载体,并在真核细胞中表达. 方法: 用RT-PCR方法从西安地区丙型肝炎患者血清中扩增
【机 构】
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第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,陕西,西安,710038
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目的 : 构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)第60-80位氨基酸多肽缺失核蛋白的真核表达载体,并在真核细胞中表达. 方法: 用RT-PCR方法从西安地区丙型肝炎患者血清中扩增HCV C区及部分E1区基因并进行克隆、测序,以此为模板用重叠延伸拼接方法扩增第60-80 位氨基酸多肽基因缺失的核蛋白基因片段(C510),将其定向克隆入哺乳动物高效表达载体pCI-neo中,通过Lipofectamine2000转染入p815细胞,经间接免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜和Western-Blotting方法检测细胞中目的蛋白的表达.结果: 从患者血清中成功克隆出HCV C区基因,序列及系统发生树分析结果显示为1b型;测序结果显示构建的第60-80位氨基酸多肽缺失核蛋白基因的重组真核表达质粒pCI-510基因序列准确;免疫荧光和免疫印迹方法均证实目的蛋白p170可在p815细胞中表达.结论: 重组体pCI-510构建正确,其目的基因在p815细胞中可有效表达,为进一步的研究奠定了基础.
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