同分异构体在中药中广泛存在,而能量分辨质谱技术已被用于同分异构体的区分.然而,传统的能量分辨质谱主要通过针泵注射对照品来进行,难以实现高通量、自动化分析.该文利用LC-MS实现能量分辨质谱的在线化,并以中药中广泛分布的山柰酚和木犀草素这一对同分异构体为例,阐述在线能量分辨质谱在同分异构体区分中的应用.通过LC-QE-Orbitrap-MS获得山柰酚和木犀草素的高分辨质谱数据,并对裂解途径进行了推导,发现两者的准分子离子峰均为m/z 285[M-H]-,通过RDA裂解产生相同的碎片离子m/z 151和133.进一步利用LC-Qtrap-MS平台,构建特征离子对m/z 285＞151和285＞133,两者均衍生出1组拟离子对(PITs),赋予每1组拟离子对系列递进式的碰撞能(如-5、-8、-11 eV等),利用多反应监测模式采集各拟离子对的峰面积.每组拟离子对的响应值均采用高斯曲线拟合得到裂解曲线,定义裂解曲线顶点为最佳碰撞能(OCE),分别计算山柰酚和木犀草素不同离子对的OCE.对于离子对m/z 285＞ 151,山柰酚和木犀草素的OCE分别为-29.06 eV和-35.71 eV,山柰酚和木犀草素m/z 285＞ 133的OCE分别为-44.15 eV和-49.01 eV.由于羟基取代位置的不同,化学键断裂所需的能量也不尽相同,使得山柰酚和木犀草素不同离子对的OCE均存在显著差异.因此,在线能量分辨质谱能够实现同分异构体的高效区分,为基于LC-MS的复杂体系中化学成分的准确鉴定提供了参考.