目的了解四川省德阳市健康儿童的肠道病毒(enterovirus,EV)带毒状况,确定EV型别,并探讨其与手足口病病原谱的关系。方法 2016年5月19日在德阳市4家幼儿园采集健康儿童粪便标本进行EV核酸检测、病毒分离和核苷酸测序,根据进化树聚集确定EV型别。结果 203份标本中,EV核酸阳性81份。选取其中的60份EV核酸阳性标本(Ct≤33)进行部分VP2区直接测序和病毒分离,56份标本获取VP2区序列,29株病毒分离物获取VP1区全序列。VP1区核苷酸进化树显示,29株分离物分别与CV-A4、CV-A6、CV-A9、CV-A10、E11、E16和E30原型株聚集在一起;VP2区推导氨基酸进化树显示56份粪便标本也分别与相同的7种原型株聚集。标本VP2区定型结果和其对应的分离物VP1区定型结果一致。结论此次调查的德阳市健康儿童中EV阳性率为39.9%,检出7种EV型别。同一EV型别在1家幼儿园的多份标本中检出,提示局部存在密切接触传播。4种B组EV (CV-A9、E11、E16和E30)未在德阳市所有手足口病标本中检出过。VP1区分析是EV定型的最准确的方法;VP2区分析可初步确定EV组别,对部分EV也可正确定型,为下一步VP1区测序引物选择提供帮助。