细胞周期抑制剂PD0332991对小鼠造血干/祖细胞生物学活性的影响

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目的 探讨细胞周期抑制剂PD0332991 (C24H29N7O2)对造血干/祖细胞(HSPC)生物学行为的影响.方法 利用多抗体标记,再分别用Hoechst33342染色和FITC-Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测PD0332991作用前后小鼠骨髓造血干细胞(HSC,Lin-C-kit+Sca-1+表型细胞)及造血祖细胞(HPC,Lin-C-kit+细胞)的周期分布及细胞凋亡率;利用实时荧光定量PCR法分析PD0332991作用后HSC细胞周期相关基因、凋亡相关基因及自我更新相关基因mRNA表达水平;利用极限稀释培养法检测PD0332991作用前后HSC自我扩增水平的变化;用半固体培养法观察PD0332991对小鼠正常HPC集落形成能力的影响.结果 与未处理组相比,PD0332991处理后小鼠骨髓HSC的G1期细胞明显增多,由76.3%增加至89.5% (P<0.05),S、G2/M期明显减少,由20.5%降低至7.3% (P<0.05);HPC的G1期细胞也明显增多,由74%增加至87.4% (P<0.05),S、G2/M期细胞明显减少,由25.4%降低至11.6%(P<0.05).PD033299处理的小鼠骨髓HSPC早期凋亡率均为7%左右,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).小鼠骨髓HSC经PD0332991处理后,细胞周期相关基因CDK1、CyclinA2、CyclinF、p18、p19、p27表达水平与对照组相比分别降低了58.8%、66.4%、56.3%、62.2%、32.3%和36.5%,CDK7表达上调27.3% (P<0.05),凋亡相关基因及白我扩增相关基因表达均无明显变化.与对照组相比,PD0332991处理过的小鼠骨髓HSC与自我扩增相关的鹅卵石样区域形成细胞出现频率明显下降、HPC的造血集落形成能力下降.结论 PD0332991可明显阻滞正常小鼠HSPC的细胞周期进程,抑制其自我扩增,但对其凋亡没有明显影响。

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