目的 探讨百草枯中毒导致的内皮屏障功能障碍与p120连环蛋白(p120-ctn)的关系,以及芒果苷对p120-ctn的调节作用.方法 采用二室弥散模型培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并分为对照组(给予含10%胎牛血清的DMEM培养液)、百草枯组(给予终浓度为0.05 μmol/L的百草枯培养液)和芒果苷干预组(百草枯培养基孵育30 min后加入终浓度为20 μmol/L的芒果苷继续孵育).各组分别培养6、12、24、48、72 h后测定细胞通透性;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定p120-ctn异构体p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达;采用免疫荧光分析并镜下观察p120-ctn的分布.结果 与对照组比较,百草枯组和芒果苷组细胞通透性均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值[(29.86±3.98)%、(24.39±2.79)%比(11.71±1.67)%,均P< 0.05];而芒果苷组各时间点细胞通透性均显著低于百草枯组(均P<0.05).百草枯处理6 h p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达(灰度值)及p120-ctn蛋白表达(灰度值)即较对照组明显降低(p120-ctn 1A mRNA:0.150±0.024比0.433±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.316±0.043比0.701±0.020,p120-ctn蛋白:0.485±0.031比0.763±0.038,均P<0.01);而芒果苷组p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达于干预6h即较百草枯组明显增加(p120-ctn 1AmRNA:0.281 ±0.021比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.602±0.042比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.675±0.031比0.485±0.031,均P<0.01),并均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值(p120-ctn 1A mRNA:1.376±0.128比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:1.251±0.059比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.844±0.050比0.485±0.031,均P<0.01).荧光显微镜下观察,对照组p120-ctn主要分布在胞膜上,胞质内略有表达,胞核无表达;百草枯组随时间延长,细胞膜上p120-ctn表达逐渐减少,胞质和核内表达增多,细胞膜边缘模糊,细胞间隙增宽;芒果苷组相应时间点细胞膜上p120-ctn表达有所改善,胞质和核内表达减少.结论 p120-ctn下调与百草枯中毒后内皮通透性增加的机制相关,芒果苷可通过保护p120-ctn而减轻内皮损伤。
百草枯所致血管内皮损伤与p120连环蛋白的关系及芒果苷的保护作用
【摘 要】
:
目的 探讨百草枯中毒导致的内皮屏障功能障碍与p120连环蛋白(p120-ctn)的关系,以及芒果苷对p120-ctn的调节作用.方法 采用二室弥散模型培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并分为对照组(给予含10%胎牛血清的DMEM培养液)、百草枯组(给予终浓度为0.05 μmol/L的百草枯培养液)和芒果苷干预组(百草枯培养基孵育30 min后加入终浓度为20 μmol/L的芒果苷继续孵育).各组
【机 构】
:
610031四川,成都市第三人民医院/重庆医科大学附属成都第二临床学院重症医学科,611300四川,成都市第五人民医院急诊科,610031四川,成都市第三人民医院/重庆医科大学附属成都第二临床学院重症
【出 处】
:
中华危重病急救医学
【发表日期】
:
2014年26期
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