探讨2型糖尿病患者脂肪源性间充质干细胞(AMSC)对小鼠压疮创面愈合的影响。
方法(1)2016年9月，取1例60岁女性2型糖尿病患者的皮下脂肪组织，采取胶原酶消化法提取AMSC培养，取第3代细胞用于后续实验。观察细胞形态，行成骨、成软骨、成脂诱导分化鉴定，运用流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD105、CD73及CD34的表达(样本数为3)。(2)取16只6~8周龄雌性C57BL/6野生型小鼠，采用磁铁压迫皮肤的方法在每只小鼠脊柱两侧各制成1个压疮创面，将每只小鼠的2个创面配对分为糖尿病AMSC组和阴性对照组，创面内分别注射100 μL磷酸盐缓冲液(PBS)悬浮的绿色荧光蛋白标记的糖尿病AMSC(1×106个)、100 μL PBS。观察注射后21 d内2组创面的愈合情况并计算注射后5、13、17 d的创面愈合率。注射后11、21 d分别处死3只小鼠，每组切取3个创面组织，苏木精-伊红染色观察皮肤结构，Masson染色评估胶原沉积情况，免疫组织化学法计数CD31阳性表达即新生血管数。另取2组前述制备的注射后21 d创面组织标本，免疫组织化学法检测S100阳性细胞率即施万细胞新生情况。另取糖尿病AMSC组前述制备的注射后11 d创面组织标本，采用荧光示踪法观察AMSC定植情况。对数据行配对t检验并进行Bonferroni校正。
结果(1)从2型糖尿病患者皮下脂肪组织中分离培养的第3代细胞贴壁生长，多呈长梭形，呈旋涡状生长；经诱导后具有成骨、成软骨、成脂分化功能，细胞表面CD90、CD105、CD73阳性表达率高于90.00%，CD34表达率为0.46%。细胞鉴定为AMSC。(2)小鼠糖尿病AMSC组创面愈合较快，注射后17 d所有创面均完全愈合；而小鼠阴性对照组创面此时未完全闭合，表面仍有痂皮。注射后5、13、17 d，小鼠糖尿病AMSC组创面愈合率分别为(35.6±6.5)%、(87.1±2.5)%、100.0%，显著高于阴性对照组的(19.8±7.2)%、(66.2±5.2)%、(86.9±5.3)%(t=6.49、14.31、9.73，P<0.05)。与阴性对照组相比，小鼠糖尿病AMSC组创面组织注射后11 d炎性细胞浸润减少，注射后21 d可见较厚的表皮和真皮以及再生的皮肤附属器。注射后11、21 d，小鼠糖尿病AMSC组创面组织胶原百分比分别为(48.3±1.3)%、(54.1±1.7)%，明显高于阴性对照组的(41.4±1.7)%、(50.3±1.2)%(t=6.98、3.99，P<0.01)。注射后11、21 d，小鼠糖尿病AMSC组创面组织新生血管数分别为(17.2±1.3)、(18.0±2.1)个，明显多于阴性对照组的(8.0±1.4)、(14.0±1.5)个(t=10.69、3.38，P<0.01)。注射后21 d，小鼠糖尿病AMSC组创面组织S100阳性细胞率为(1.76±0.12)%，明显高于阴性对照组的(0.55±0.03)%(t=21.68，P<0.001)。注射后11 d，小鼠糖尿病AMSC组创面组织仍有AMSC定植。
结论2型糖尿病患者AMSC移植可通过促进血管再生、胶原沉积及施万细胞再生进而加快小鼠压疮创面愈合。