【摘 要】
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目的探讨microRNA-20a (miR-20a）对心肌糖代谢功能的影响，揭示miR-20a调节胰岛素抵抗和糖尿病等代谢性疾病的机制。方法以大鼠H9C2心肌细胞为研究对象，建立胰岛素抵抗的细胞模型，应用实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胰岛素抵抗心肌细胞内差异表达的microRNAs；采用miRanda靶基因预测分析筛选与葡萄糖转运蛋白4（Glut4）基因具有互补结合位点的micr
【机 构】
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目的探讨microRNA-20a (miR-20a）对心肌糖代谢功能的影响，揭示miR-20a调节胰岛素抵抗和糖尿病等代谢性疾病的机制。
方法以大鼠H9C2心肌细胞为研究对象，建立胰岛素抵抗的细胞模型，应用实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胰岛素抵抗心肌细胞内差异表达的microRNAs；采用miRanda靶基因预测分析筛选与葡萄糖转运蛋白4（Glut4）基因具有互补结合位点的microRNA；应用细胞转染技术在正常和胰岛素抵抗心肌细胞内分别转染miR-20a类似物与抑制物及相应的阴性对照物，采用qRT-PCR检测各组内miR-20a和Glut4基因表达水平，Western blotting法检测各组内Glut4蛋白表达水平；应用葡萄糖消耗和摄取实验检测各组内葡萄糖代谢水平。采用单因素方差分析及t检验进行数据分析。
结果胰岛素抵抗细胞内miR-20a相对表达量明显高于正常对照组（3.14±0.12比1.00±0.00, t=17.79, P<0.01），Glut4基因和蛋白相对表达明显低于正常对照组（0.58±0.09比1.00±0.00, t=4.71, P<0.05；0.29±0.04比1.00±0.00, t=17.18, P<0.01），miR-20a与人、大鼠、小鼠的Glut4 3′ UTR均存在互补结合位点。转染miR-20a类似物组Glut4基因和蛋白表达显著低于对照组（0.36±0.11比1.00±0.00, t=5.79, P<0.05; 0.25±0.05比1.00±0.00, t=13.87, P<0.01）；葡萄糖消耗和摄取水平显著低于对照组（48.74±3.95比100.00±0.00, t=12.97, P<0.01; 211.30±13.30比350.30±24.55, t=9.77, P<0.05）。转染miR-20a抑制物组内Glut4基因和蛋白相对表达较胰岛素抵抗组显著升高（3.63±0.31比1.00±0.00, t=8.39, P<0.01; 3.28±0.41比1.00±0.00, t=5.55, P<0.05）；葡萄糖消耗和摄取能力显著高于胰岛素抵抗组（240.30±34.12比100.00±0.00, t=3.77, P<0.05; 267.70±31.86比122.10±12.94, t=4.33, P<0.05）。
结论MicroRNA-20a影响正常和胰岛素抵抗心肌细胞糖代谢水平，可能与其靶向调节Glut4表达有关。
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