【摘 要】
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本文建立大肠埃希菌高效表达重组人胰岛素样生长因子-1(recombinant human insulin-like growth factor-1,rhIGF-1)的制备工艺。应用本实验室构建的基因工程菌E.coli BL21(DE
【机 构】
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中国医药工业研究总院上海医药工业研究院创新药物与制药工艺国家重点实验室; 上海多米瑞生物技术有限公司;
【基金项目】
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“十三五”重大新药创制科技重大专项——儿童用药品种及关键技术开发(2018ZX09721003-008-012)
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本文建立大肠埃希菌高效表达重组人胰岛素样生长因子-1(recombinant human insulin-like growth factor-1,rhIGF-1)的制备工艺。应用本实验室构建的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-Sp1-IGF-1,对其进行高密度发酵和IPTG诱导表达,发酵液经双水相萃取获得包涵体,产量为3 g/L;对包涵体进行变性和复性,建立反相HPLC法监测复性过程,复性正确率可达600%;复性液经过柱色谱纯化和冷冻干燥,样品纯度大于98%,总收率为35%。本工艺得到的rhIGF-1,分子质量与理论值一致,其HPLC保留时间、肽图和生物活性均与参比制剂一致。
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