【摘 要】
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目的 探讨造血干祖细胞在缺乏造血因子作用下细胞的死亡方式以及细胞铁死亡关键调控蛋白GPX4表达水平的变化;探索铁死亡抑制剂Fer-1(Ferrostatin-1)联合造血因子作用对造血细
【机 构】
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青岛大学附属医院医学研究中心分子诊断与再生医学实验室,山东青岛 266555;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850;吉林大学护理学院,长春 130021
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目的 探讨造血干祖细胞在缺乏造血因子作用下细胞的死亡方式以及细胞铁死亡关键调控蛋白GPX4表达水平的变化;探索铁死亡抑制剂Fer-1(Ferrostatin-1)联合造血因子作用对造血细胞增殖的影响,为造血干祖细胞体外扩增提供理论依据.方法 采用CCK-8增殖实验检测细胞的增殖;不同浓度的小分子化合物Erastin(1,2.5,5,7.5,10μmol/L)以及Fer-1(1μmol/L)作用于细胞,检测细胞的存活率;流式细胞术测定TF-1细胞铁死亡相关脂质活性氧(ROS)的表达;Western印迹测定铁死亡相关蛋白GPX4的表达.结果 CCK-8细胞增殖实验显示,TF-1细胞在Erastin诱导及缺乏粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的诱导下均会发生死亡,Fer-1可逆转细胞死亡;流式和Western印迹结果表明,Fer-1抑制TF-1细胞内脂质ROS的产生,促进GPX4蛋白的表达.原代造血干祖细胞增殖实验结果表明,Fer-1可逆转人脐带血CD34+细胞在低剂量造血因子作用下诱导的细胞铁死亡,同时促进细胞的增殖;Western印迹结果显示,在人脐带血CD34+细胞低剂量造血因子的作用下,GPX4随Fer-1浓度增加而表达上调.结论 造血细胞在体外扩增的过程中会出现细胞铁死亡,通过铁死亡抑制剂Fer-1结合造血因子可促进细胞的增殖.造血因子联合铁死亡抑制剂将是提高造血干、祖细胞扩增效率的新策略.
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