【摘 要】
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目的 观察反义寡核苷酸(ASODN)、RNA干扰(RNAi)两种方法对端粒酶的抑制效应.方法 设计合成寡核苷酸及siRNA链,两者均在脂质体介导下转染K562细胞,RNA干扰采用直接转染后筛选
【机 构】
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大连医科大学附属第一医院血液科,烟台毓璜顶医院ICU科,大连大学附属中山医院血液科
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目的 观察反义寡核苷酸(ASODN)、RNA干扰(RNAi)两种方法对端粒酶的抑制效应.方法 设计合成寡核苷酸及siRNA链,两者均在脂质体介导下转染K562细胞,RNA干扰采用直接转染后筛选高效链,质粒载体构建,再转染后分析效果.结果 合成3条siRNA链,直接转染后,检测hTERTmRNA表达,发现第一、第二条链有效,第三条链无效,人端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达抑制仅维持48 h,72 h即恢复.筛选两条链构建质粒载体,转染后P-1组作用48 h后hTERT mRNA为0.39±0.13,72 h为0.57±0.32,P-2组48 h为0.55±0.20,72 h为0.88±0.23,端粒酶相对活性P-1组48 h为0.42±0.07,72 h为0.31±0.08,P-2组48 h为0.49±0.27,72 h为0.39±0.03.siRNA的最佳作用浓度为:100μmol/L.反义寡核苷酸以0.6 μmol/L浓度组抑制作用最佳,24h后hTERTmRNA为0.42±0.16.48h为0.71±0.18.端粒酶相对活性24 h为0.52±0.002,48 h为0.482±0.018.结论 靶向hTERT的反义寡核苷酸和RNA干扰均可以抑制hTERTmRNA表达,从而抑制端粒酶活性,抑制效果与靶位点选择密切相关.RNA干扰效果优于反义寡核苷酸,前者不仅表现为抑制效率高,且持续时间长.质粒载体构建后的RNA干扰优于化学合成后直接转染的RNA干扰.
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