探讨顺铂作用于叶酸结合蛋白 (FOLR1) 基因表达上调的卵巢上皮性癌 (卵巢癌) 细胞系SKOV3细胞后对其生物学功能的影响。

将FOLR1基因与pWPI质粒进行慢病毒包装,构建重组质粒p WPI-FOLR1并转染入SKOV3后得到p WPI-FOLR1-SKOV3细胞,作为重组质粒转染组;以同样方法将pWPI质粒转染入SKOV3后得到pWPI-SKOV3细胞,作为空载体转染组;并设立未转染的SKOV3细胞为空白对照组,采用逆转录 (RT) -PCR技术和蛋白印迹法分别检测3组细胞中FOLR1 mRNA和蛋白的表达。采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT) 比色法,检测并绘制3组细胞的生长曲线,检测3组细胞对顺铂的敏感性[以50%抑制浓度 (IC₅₀) 表示,选择重组质粒转染组的IC₅₀作为下一步实验中顺铂浓度的基准],并检测不同浓度 (分别为0.5×IC₅₀、1×IC₅₀、2×IC₅₀,即分别为1.8、3.6、7.2μg/ml;下同) 顺铂作用不同时间 (分别为24、48、72 h,下同) 后3组细胞生长的抑制率;采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用不同时间后3组细胞的凋亡率,及不同浓度顺铂作用48 h后3组细胞的细胞周期比例;高效液相色谱法检测同一浓度 (3.6μg/ml) 顺铂作用48 h后3组细胞内顺铂的浓度。

RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测显示,重组质粒转染组细胞中有FOLR1 mRNA和蛋白的表达,而空载体转染组、空白对照组细胞中无FOLR1 mRNA和蛋白的表达。MTT比色法检测显示,重组质粒转染组细胞生长速度最快、对顺铂最敏感 (其IC₅₀最低,为3.6μg/ml) 、相同作用条件 (包括顺铂的浓度和作用时间) 下其细胞生长的抑制率最高,分别与空载体转染组、空白对照组比较,差异均有统计学意义 (P<0.05) ;而空载体转染组与空白对照组比较,差异无统计学意义 (P>0.05) 。流式细胞仪检测显示,3组细胞的凋亡率随着顺铂浓度 (分别为1.8、3.6、7.2μg/ml) 的升高及作用时间 (分别为24、48及72 h) 的延长而升高,呈明显的剂量-时间依赖关系 (P<0.05),S期细胞比例随着顺铂浓度的升高而升高,呈明显的剂量依赖关系 (P<0.05) ;在相同的作用条件下,重组质粒转染组细胞的凋亡率、S期细胞比例分别与空载体转染组、空白对照组比较,差异均有统计学意义 (P<0.05),而空载体转染组与空白对照组比较,差异无统计学意义 (P>0.05) 。高效液相色谱法检测显示,同一浓度 (3.6μg/ml) 的顺铂作用48 h后,重组质粒转染组细胞内顺铂浓度为 (2.60±0.21) μg/10⁶个细胞,高于空载体转染组的 (1.49±0.12) μg/10⁶个细胞和空白对照组的 (1.54±0.11) μg/10⁶个细胞,差异均有统计学意义 (P<0.05) ;而空载体转染组与空白对照组比较,差异无统计学意义 (P>0.05) 。

卵巢癌SKOV3细胞中FOLR1基因表达上调后,SKOV3细胞的生物学功能发生改变,表现为对顺铂的敏感性增加、细胞内顺铂浓度升高、细胞周期中S期比例增加、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。