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【摘 要】 目的：比较不同药物调制的氢氧化钙糊剂对粪肠球菌的抗菌效果。方法：采用琼脂扩散法测定生理盐水，次氯酸钠，甘油，醋酸氯已定这四种药物调制的氢氧化钙Ca（OH）2糊剂对粪肠球菌抑菌圈的大小。结果：和生理盐水、甘油、NaCIO组相比，醋酸氯已定配制的Ca（OH）2糊剂的抑菌圈直径最大（P<0.05）；对比甘油、生理盐水与NaCIO配制的Ca（OH）2糊剂抑菌圈直径，差异不大（P>0.05），不具备统计学差异。结论：醋酸氯已定调制的氢氧化钙糊剂对粪肠球菌的抗菌效果最优。
【关键词】 氢氧化钙 粪肠球菌 根管消毒 药物敏感试验
临床上顽固性根尖周炎患者，即使经过完善的根管成形，器械和化学预备，根管消毒及根充后，仍然不能完全清除侧支根管、副根管和根尖分歧等部位的微生物。有研究发现，粪肠球菌是顽固性或继发性根管内感染的主要致病菌[1]，有极强的耐药性，耐强碱，很容易造成根管的再感染。因而寻找一种抗粪肠球菌效果更好的抗菌剂迫在眉睫。临床上诊间封药公认的有效消毒剂是氢氧化钙[2]。本文希望通过对氢氧化钙和不同药物调制成糊剂，进行药物敏感实验，对其抗菌性能进行测试，发挥药物的协同作用，以达到更强的抗菌效果，以期初步评估不同药物调制的Ca（OH）2糊剂抑制根管粪肠球菌的具体效果，从而为临床根管治疗提供一些参考。
1 材料与方法
1.1 实验室准备与分组
分为4组，1组生理盐水组，2组次氯酸钠组，3组甘油组，4组醋酸氯已定组。每组6个培养基。
1.2 细菌培养和药敏试验
采用琼脂扩散法测定药物的敏感试验。将粪肠球菌菌株ATCC19433（广州市微生物研究所提供）复苏后，利用接种环从中挑取一些菌落，并按要求配制为悬浊液，其浊度保持在0.5M。然后，取24个血平板培养皿，并将其放在高温高压条件下进行消毒处理。取无菌不锈钢管在培养基中部制作一个小孔，孔深5mm，直径为6mm，再将准备好的相关菌液接种到该培养基上面。通过平勺式取样器取一定剂量的Ca（OH）2，再加入四种药液，分别是生理盐水、NaCIO、甘油、醋酸氯已定。然后将其调和为糊状，将糊剂分别放到每个培养基小孔中，值得注意的是，糊剂量要合适，以糊剂和小孔边缘齐平为准。一组6个培养平皿，将全部平皿均放到细胞培养箱中培养48h。培养箱中温度调为37℃，并放入CO2（5%）、N2（95%）。用游标卡尺测量每个培养皿小孔周围抑菌圈的最小直径，每个抑菌环测量3次，取平均值。
1.3 统计学处理
本次研究选择SPSS11.0统计学软件对所得数据进行专门的处理。其中，对每组方差采用齐性评价，四组方差齐，通过单因素方差（ONE-WAY ANOVA）进行多组对比；利用SNK法进行组间两两对比。P<0.05为差异有统计学意义
2 结果
本次实验得出了每组Ca（OH）2糊剂的抑菌圈直径大小，详见表1。
将实验所得数据采用单因素方差分析，并经SNK统计学分析处理后发现四种药物中，醋酸氯已定配制的Ca（OH）2糊剂的抑菌圈直径最大，明显大于其余三种药液配制的糊剂（P<0.05），统计学上有显著性差异。对比生理盐水、甘油与NaCIO配制的Ca（OH）2糊剂的抑菌圈直径，发现差异不大（P>0.05），不具备相关统计学意义。
3 讨论
琼脂扩散法是我们常用的一种评价药物抗菌能力的实验做法。通过观察琼脂平板上抑菌圈直径大小来了解相关药物对实验菌的抑制效果。该实验法常被用于评定各种牙体材料的抗菌能力。本次研究的检测对象为Ca（OH）2糊剂，操作者先在琼脂平板上打出一个标准的小孔，再把配置好的糊剂放到孔内。然后观察小孔附近抑菌圈的直径大小，从而评定不同糊剂对粪肠球菌的实际抑菌效果。但该实验也存在一定局限性，表现在以下几方面：接种密度尚无具体的标准、琼脂粘度、培养基是否充分，平板保存条件、接种时的温度与时间等。另外，此类实验还存在一些缺点，表现在敏感度不够，半定量，无法有效区分不同材料的抑菌与杀菌特性。因此，该实验结果主要受两方面影响，一是材料在培养基上的扩散能力，二是材料对某些特定微生物的毒性。
作为革兰阳性兼性厌氧菌，粪肠球菌一般存在于人类与动物的胃肠道与泌尿生殖器官中，但也存在于口腔中。该病菌比较容易培养，可感染牙本质小管。该病菌生存能力极强，可完全适应根管内的恶劣生存环境，即使在没有任何营养的环境下也能存活10天左右。只有在高于pHlO-11条件下才能将其杀死。洗必泰和相关细菌接触后便会破坏细胞膜，从而导致细胞内容物发生外溢，达到杀菌的目的。如果采用浓度较大的洗必泰杀菌，洗必泰会和细胞内的核酸与三磷酸腺苷等含磷酸盐物质发生反应，进而导致胞浆发生沉淀。其阳离子还能够和牙本质中的羟磷灰石相结合，可长期预防相关微生物聚集到根管内。Basrani等学者研究后发现2%洗必泰对粪肠球菌有良好的杀菌效果，将被该病菌感染的根管放入培养皿，并和2%洗必泰一起培养1周，可观察到根管内没有粪肠球菌。但临床上用棉捻进行洗必泰溶液封药，药效维持时间短，无法使洗必泰持续发挥出抑菌作用，特别是对根管壁内的细菌效果甚微。这也是洗必泰无法在根管消毒方面大量应用的主要原因。Lima等研究证实2%醋酸氯已定具有较强的杀菌效果，可同时将24h与72h生物膜内的很多细菌杀死。
通过本次实验可知，甘油、生理盐水、醋酸氯已定、NaCIO四种药液配制的Ca（OH）2糊剂都能有效抑制粪肠球菌，但醋酸氯已定所配制的Ca（OH）2糊剂的抑菌效果最显著，易于导入根管，操作简单，可以发挥持续的抑菌作用，易于临床推广。
参考文献
[1]周学东，肖晓蓉.口腔微生物学.第一版.成都：四川大学出版社2002：384-392.
[2]陈黄琴，范兵，樊明文.经治根管而失败的微生物原因及控制方法[J].國外医学口腔医学分册.2005，32（1）：58-60.
【关键词】 氢氧化钙 粪肠球菌 根管消毒 药物敏感试验
临床上顽固性根尖周炎患者，即使经过完善的根管成形，器械和化学预备，根管消毒及根充后，仍然不能完全清除侧支根管、副根管和根尖分歧等部位的微生物。有研究发现，粪肠球菌是顽固性或继发性根管内感染的主要致病菌[1]，有极强的耐药性，耐强碱，很容易造成根管的再感染。因而寻找一种抗粪肠球菌效果更好的抗菌剂迫在眉睫。临床上诊间封药公认的有效消毒剂是氢氧化钙[2]。本文希望通过对氢氧化钙和不同药物调制成糊剂，进行药物敏感实验，对其抗菌性能进行测试，发挥药物的协同作用，以达到更强的抗菌效果，以期初步评估不同药物调制的Ca（OH）2糊剂抑制根管粪肠球菌的具体效果，从而为临床根管治疗提供一些参考。
1 材料与方法
1.1 实验室准备与分组
分为4组，1组生理盐水组，2组次氯酸钠组，3组甘油组，4组醋酸氯已定组。每组6个培养基。
1.2 细菌培养和药敏试验
采用琼脂扩散法测定药物的敏感试验。将粪肠球菌菌株ATCC19433（广州市微生物研究所提供）复苏后，利用接种环从中挑取一些菌落，并按要求配制为悬浊液，其浊度保持在0.5M。然后，取24个血平板培养皿，并将其放在高温高压条件下进行消毒处理。取无菌不锈钢管在培养基中部制作一个小孔，孔深5mm，直径为6mm，再将准备好的相关菌液接种到该培养基上面。通过平勺式取样器取一定剂量的Ca（OH）2，再加入四种药液，分别是生理盐水、NaCIO、甘油、醋酸氯已定。然后将其调和为糊状，将糊剂分别放到每个培养基小孔中，值得注意的是，糊剂量要合适，以糊剂和小孔边缘齐平为准。一组6个培养平皿，将全部平皿均放到细胞培养箱中培养48h。培养箱中温度调为37℃，并放入CO2（5%）、N2（95%）。用游标卡尺测量每个培养皿小孔周围抑菌圈的最小直径，每个抑菌环测量3次，取平均值。
1.3 统计学处理
本次研究选择SPSS11.0统计学软件对所得数据进行专门的处理。其中，对每组方差采用齐性评价，四组方差齐，通过单因素方差（ONE-WAY ANOVA）进行多组对比；利用SNK法进行组间两两对比。P<0.05为差异有统计学意义
2 结果
本次实验得出了每组Ca（OH）2糊剂的抑菌圈直径大小，详见表1。
将实验所得数据采用单因素方差分析，并经SNK统计学分析处理后发现四种药物中，醋酸氯已定配制的Ca（OH）2糊剂的抑菌圈直径最大，明显大于其余三种药液配制的糊剂（P<0.05），统计学上有显著性差异。对比生理盐水、甘油与NaCIO配制的Ca（OH）2糊剂的抑菌圈直径，发现差异不大（P>0.05），不具备相关统计学意义。
3 讨论
琼脂扩散法是我们常用的一种评价药物抗菌能力的实验做法。通过观察琼脂平板上抑菌圈直径大小来了解相关药物对实验菌的抑制效果。该实验法常被用于评定各种牙体材料的抗菌能力。本次研究的检测对象为Ca（OH）2糊剂，操作者先在琼脂平板上打出一个标准的小孔，再把配置好的糊剂放到孔内。然后观察小孔附近抑菌圈的直径大小，从而评定不同糊剂对粪肠球菌的实际抑菌效果。但该实验也存在一定局限性，表现在以下几方面：接种密度尚无具体的标准、琼脂粘度、培养基是否充分，平板保存条件、接种时的温度与时间等。另外，此类实验还存在一些缺点，表现在敏感度不够，半定量，无法有效区分不同材料的抑菌与杀菌特性。因此，该实验结果主要受两方面影响，一是材料在培养基上的扩散能力，二是材料对某些特定微生物的毒性。
作为革兰阳性兼性厌氧菌，粪肠球菌一般存在于人类与动物的胃肠道与泌尿生殖器官中，但也存在于口腔中。该病菌比较容易培养，可感染牙本质小管。该病菌生存能力极强，可完全适应根管内的恶劣生存环境，即使在没有任何营养的环境下也能存活10天左右。只有在高于pHlO-11条件下才能将其杀死。洗必泰和相关细菌接触后便会破坏细胞膜，从而导致细胞内容物发生外溢，达到杀菌的目的。如果采用浓度较大的洗必泰杀菌，洗必泰会和细胞内的核酸与三磷酸腺苷等含磷酸盐物质发生反应，进而导致胞浆发生沉淀。其阳离子还能够和牙本质中的羟磷灰石相结合，可长期预防相关微生物聚集到根管内。Basrani等学者研究后发现2%洗必泰对粪肠球菌有良好的杀菌效果，将被该病菌感染的根管放入培养皿，并和2%洗必泰一起培养1周，可观察到根管内没有粪肠球菌。但临床上用棉捻进行洗必泰溶液封药，药效维持时间短，无法使洗必泰持续发挥出抑菌作用，特别是对根管壁内的细菌效果甚微。这也是洗必泰无法在根管消毒方面大量应用的主要原因。Lima等研究证实2%醋酸氯已定具有较强的杀菌效果，可同时将24h与72h生物膜内的很多细菌杀死。
通过本次实验可知，甘油、生理盐水、醋酸氯已定、NaCIO四种药液配制的Ca（OH）2糊剂都能有效抑制粪肠球菌，但醋酸氯已定所配制的Ca（OH）2糊剂的抑菌效果最显著，易于导入根管，操作简单，可以发挥持续的抑菌作用，易于临床推广。
参考文献
[1]周学东，肖晓蓉.口腔微生物学.第一版.成都：四川大学出版社2002：384-392.
[2]陈黄琴，范兵，樊明文.经治根管而失败的微生物原因及控制方法[J].國外医学口腔医学分册.2005，32（1）：58-60.