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根据GeneBank中草鱼呼肠孤病毒（grass carp reovirus，GCRV）104株VP6蛋白的全基因序列（HM234682）设计一对特异引物，以提取的GCRV-104核酸为模板，采用RT．PCR技术扩增VP6蛋白编码基因，并将其克隆到含强启动子AOXI的毕赤酵母（Pichia paztoris）表达载体pPICZB上。重组酵母质粒pPICZB—VP6经SacI线性化，电击转化到毕赤酵母KM71菌株中，Zeocin抗性平板上筛选高拷贝转化子。阳性转化子在30℃，0．5％（V／V）的甲醇添加量的