探讨二十二碳六烯酸(DHA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)的影响。
方法选取体重(200±20)g,年龄6~8周的雄性SD大鼠20只为研究对象,采用随机数字表法分为糖尿病组(10只)和正常对照组(10只)。糖尿病组采用链脲霉素腹腔内注射,2周后测定大鼠血糖浓度,如血糖浓度低于300 mg/dl,则用等剂量链脲霉素再次腹腔内注射,当血糖浓度持续8周高于300 mg/dl视为造模成功。正常对照组大鼠腹腔内注射生理盐水。酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流并比较不同浓度DHA作用下正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0。两两比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析。
结果当刺激电压为0、20、40、60、80、100、120 mV时,随着刺激电压增加,正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均增加(F= 15.28、9.72,均P<0.05)。与正常对照组相比,当刺激电压>60 mV后,糖尿病组BK通道NP0明显降低(分别为0.56±0.05比0.22±0.02, 1.11±0.09比0.33±0.09,2.85±0.10比0.86±0.12, 3.05±0.15比1.01±0.13,t=3.62、4.27、6.32、8.14,均P<0.05)。在刺激电压60 mV和钙离子浓度1 μmol/L条件下,当电极外液DHA浓度为0、0.01、0.10、0.30、1.00 μmol/L时,正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均无明显增加(F= 3.01、2.61,均P>0.05);继续增加DHA的浓度,当DHA浓度为3、5、10 μmol/L时,对照组BK通道NP0呈浓度依赖性增加,糖尿病组NP0呈浓度依赖性增加(F=10.21、7.32,均P<0.05)。在DHA浓度相同情况下,糖尿病组BK通道NP0均低于对照组(t=2.71~8.54,均P<0.05)。
结论糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道功能受损,但DHA仍可激活BK通道,增加NP0,从而扩张冠状动脉而起保护作用。