【摘 要】
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目的:为进一步研究紧密连接蛋白claudin-1和claudin-2在结肠直肠癌中的作用,分别构建包含claudin-1和claudin-2基因编码区的重组质粒,并在人类结肠癌细胞株T84中表达.方法:从
【机 构】
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广西桂林医学院生物化学与分子生物学教研室,Department of Biochemistry
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目的:为进一步研究紧密连接蛋白claudin-1和claudin-2在结肠直肠癌中的作用,分别构建包含claudin-1和claudin-2基因编码区的重组质粒,并在人类结肠癌细胞株T84中表达.方法:从T84细胞中提取总RNA,反转录PCR获得cDNA,插入pCRⅡ-TOPO质粒中测序鉴定.将测序正确的cDNA连接入pcDNA3.1(-)表达载体,进一步测序鉴定后转染入T84细胞,并采用反转录荧光定量实时PCR技术及Western blot技术检测重组质粒在T84细胞中的表达.结果:重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列分析,显示所克隆的DNA分子大小及序列正确.经重组质粒转染的T84细胞能大量稳定地表达目标蛋白.结论:本研究成功地构建了claudin-1/pcDNA3.1(-)和claudin-2/pcDNA3.1(-)重组表达质粒,并能在结肠癌细胞中稳定表达.
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