【摘 要】
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采用RT～PCR,从重症肝炎病人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells PBMCs)的mRNA中扩增高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)基因,构建
【机 构】
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中南大学湘雅医院传染科,长沙,410008;Department of Emergency Medicine, North Shore University Hospital ,300 Communi
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采用RT～PCR,从重症肝炎病人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells PBMCs)的mRNA中扩增高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)基因,构建重组表达质粒pGEX4T-1-HMGB1,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中HMGB1基因(NM_002128)一致.诱导表达的融合蛋白GST-HMGB1,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化,经Thrombin酶切得到HMGB1.结果显示:经Weste-blotting检测,GST-HMGB1和HMGB1均具有免疫活性;ELISA和MTT检测发现,两者均能刺激RAW264.7细胞产生大量TNF-α,明显刺激HeLa细胞增殖.GST-HMGB1具有良好的生物学活性,为今后的研究打下了基础.
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