【摘 要】
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【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊
【机 构】
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石河子大学动物科技学院; 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室; 新疆生产建设兵团第五师91团; 伊宁县动物卫生监督所;
【基金项目】
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兵团国际合作项目(2013BC004);新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室项目资助(2013KLS01);优质转基因肉羊新品种培育(2013ZX08008-003);国家自然基金项目(31360276);兵团博士资金项目(2009JC05);兵团青年科技创新基金(2013CB021)
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【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染效率。【结果】通过测定细胞转染效率,得到较佳电转方案:L电转液100μL悬浮绵羊成纤维细胞,采用CZ-167电转程序,质粒浓度4 g,2×106个细胞,电击一次,电转后37℃放置10 min可获得理想的转染效率。
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