【摘 要】
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目的:在大肠杆菌中表达KOX12蛋白,为进一步研究它的功能奠定基础.方法:根据GenBank中KOX12的基因序列设计相应的引物,用RT-PCR的方法从肺癌细胞株中扩增得到KOX12片段,将它克
【机 构】
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上海理工大学医疗器械与食品学院,上海杨浦区安图医院医学实验科,鸟越俊彦
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目的:在大肠杆菌中表达KOX12蛋白,为进一步研究它的功能奠定基础.方法:根据GenBank中KOX12的基因序列设计相应的引物,用RT-PCR的方法从肺癌细胞株中扩增得到KOX12片段,将它克隆到PcDNA3.1F2/FOXMl质粒,然后经BamHI和XhoI双酶切,得到修饰过的KOX12基因片段,构建原核表达质粒PQE30/KOX12,以大肠杆菌M15为宿主菌表达目的蛋白,并采用Ni-NTA agarose亲和层析对目的蛋白进行了纯化.结果:构建了PQE30/KOX12原核表达体系,并检测到KOX12蛋白的有效表达.结论:成功地构建了原核表达质粒PQE30/KOX12并表达了KOX12蛋白,为进一步研究它的功能奠定了基础.
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