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目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对退变髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPC)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)表达的调控作用及其相关分子机制.方法 选取临床上接受椎间盘摘除术的10例患者,其中5例为年轻脊柱爆裂骨折患者,作为对照组;余5例为老年腰椎间盘突出症患者,作为退变组.取两组患者髓核组织,免疫组织化学染色比较β-catenin的原位表达,Western blot检测β-catenin、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白表达.取退变组髓核组织分离、培养NPC,分别用IL-1β单独(B组)或联合RES (C组)刺激第3代NPC,并设未刺激细胞作为空白对照组(A组),Western blot检测Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白表达.进一步采用小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)靶向沉默SIRT1和β-catenin后,采用Western blot、实时荧光定量PCR检测β-catenin、SIRT1蛋白和基因表达.用完全培养基(1组)、IL-1β(2组)、RES+IL-1β(3组)、SIRT1-siRNA+RES+IL-1β(4组)刺激第3代NPC培养24 h后,细胞免疫荧光染色检测β-catenin核转位情况;用完全培养基(Ⅰ组)、IL-1β(Ⅱ组)、IL-1β+β-catenin-siRNA(Ⅲ组)、IL-1β+RES(Ⅳ组)、IL-1 β+RES+SIRT 1-siRNA(Ⅴ组)刺激第3代NPC培养24 h后,采用Westernblot检测Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白表达.结果 免疫组织化学染色及Western blot检测示,与对照组比较,退变组髓核组织中β-catenin阳性表达的细胞比例显著升高(t=4.616,P=0.010);β-catenin蛋白相对表达量显著升高,Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白相对表达量显著下降(P＜0.05).细胞学实验发现,B组β-catenin蛋白相对表达量显著高于A、C组,Ⅱ型胶原和Aggrecan相对表达量显著低于A、C组(P＜0.05).siRNA转染后,Western blot检测显示SIRT1、β-catenin蛋白表达显著降低(P＜0.05).细胞免疫荧光染色结果进一步提示与3组相比,4组SIRT1被siRNA沉默后,RES减弱的β-catenin核转位现象加剧.Western blot检测示,Ⅱ组Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白表达较Ⅰ组明显降低(P＜0.05);Ⅲ组NPC转染β-catenin-siRNA后,IL-1β对ECM的降解作用被明显抑制,Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白表达较Ⅱ组明显升高(P＜0.05);Ⅴ组NPC转染SIRT1-siRNA后,抑制了RES对ECM降解的保护作用,Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白表达较Ⅳ组明显降低(P＜0.05).结论 RES可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路维持NPC ECM的表达,为椎间盘退行性疾病的治疗提供了新思路.