【摘 要】
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为了快速且准确地对疱疹病毒基因组进行基因敲除、插入或者点突变等修饰,通过同源重组将马立克氏病病毒(MDV)超强毒株Md5基因组克隆到细菌人工染色体(BAC)。将筛选的阳性重组
【机 构】
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河南农业大学动物医学院; 河南农业大学国家动物免疫学国际联合研究中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.31802160);河南农业大学高层次“拔尖人才”项目(No.30500690);2020年度河南省留学回国人员科研择优项目(No.30602136)资助~~
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为了快速且准确地对疱疹病毒基因组进行基因敲除、插入或者点突变等修饰,通过同源重组将马立克氏病病毒(MDV)超强毒株Md5基因组克隆到细菌人工染色体(BAC)。将筛选的阳性重组体DNA电转进DH10B菌株,用PCR及限制性片段多态分析(RFLP)方法鉴定含Md5全基因组的BAC克隆。将阳性重组体DNA转染入鸡胚成纤维细胞(CEF),拯救出重组病毒,命名为Md5BAC。进一步利用Red酶介导的两步法基因重组技术构建MDVlorf10基因敲除毒株。为了验证被敲除基因功能的特异性,将lorf10插入原位点以构建基因复原毒株。将构建的重组毒株分别感染CEF细胞,用间接免疫荧光试验确认重组病毒均包装成功;病毒生长曲线结果表明,lorf10敲除不影响病毒的体外增殖。总之,这为其他疱疹病毒的基因组编辑提供了技术参考。
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