【摘 要】
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基于遗传密码扩增技术实现向蛋白质中终止密码子处定点引入非天然氨基酸会不可避免地造成截短型蛋白堆积以及产率降低.通过利用细菌天然存在反式翻译机制,即tmRNA介导的蛋白降解机制,作者设计了 ssrA-X标签.将ssrA-X插入目标蛋白,利用截短型蛋白的C端暴露出ssrA标签能够被SspB识别,进而被clpX降解的特性,完全消除了截短型蛋白,同时增加了含非天然氨基酸的蛋白产量.通过荧光蛋白CpVenus,融合蛋白GFP-Spycatcher,膜展示蛋白OmpA-Darpins分别验证了 ssrA-X标签的可行
【机 构】
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中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京211198
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基于遗传密码扩增技术实现向蛋白质中终止密码子处定点引入非天然氨基酸会不可避免地造成截短型蛋白堆积以及产率降低.通过利用细菌天然存在反式翻译机制,即tmRNA介导的蛋白降解机制,作者设计了 ssrA-X标签.将ssrA-X插入目标蛋白,利用截短型蛋白的C端暴露出ssrA标签能够被SspB识别,进而被clpX降解的特性,完全消除了截短型蛋白,同时增加了含非天然氨基酸的蛋白产量.通过荧光蛋白CpVenus,融合蛋白GFP-Spycatcher,膜展示蛋白OmpA-Darpins分别验证了 ssrA-X标签的可行性.
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