改进后的验证SREBP-1c下游调控基因的染色质免疫共沉淀方法

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【摘要】

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目的以SREBP-1c下游调控基因为例,对HEK 293T细胞进行染色质免疫共沉淀(chromatin co-immunoprecipitation, CHIP)实验改进,获得更好实验结果。方法对常规CHIP改进方法包括细

【作者】

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李建宁李旺杨玲玲李雨涵祁慧宋辉李岩

【机构】

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宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系,宁夏医科大学内分泌研究所

【出处】

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广东医学

【发表日期】

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2019年17期

【关键词】

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染色质共沉淀 DNA 蛋白质 PCR

【基金项目】

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宁夏医科大学科学研究基金资助项目(编号:XY2017001);宁夏卫生计生委重点科研课题(编号:2018-NW-002)

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目的以SREBP-1c下游调控基因为例,对HEK 293T细胞进行染色质免疫共沉淀(chromatin co-immunoprecipitation, CHIP)实验改进,获得更好实验结果。方法对常规CHIP改进方法包括细胞洗涤时添加蛋白酶抑制剂PMSF、免疫沉淀复合物采用3步洗涤法、解交联采用蛋白酶K 56℃水浴10 min、样品DNA采用基因组提取试剂盒回收。结果与常规CHIP相比,改进后的CHIP获得纯度更高的样品DNA。结论改进后方法更适用于细胞染色质免疫共沉淀,使细胞中基因表达调控研究中DNA提

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