【摘 要】
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目的构建乙肝表面抗原-人微小病毒B19 VP2融合蛋白的原核表达系统,并检测其表达蛋白的抗原反应性。方法用PCR扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因及B19病毒VP2基因,分别重组入pGEM-T
【机 构】
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郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室,河南省煤田地质局一队医院,武警河南郑州消防支队卫生队,郑州大学第一附属医院妇产科,郑州大学第一附属医院妇产科,郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室 河南郑州4
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目的构建乙肝表面抗原-人微小病毒B19 VP2融合蛋白的原核表达系统,并检测其表达蛋白的抗原反应性。方法用PCR扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因及B19病毒VP2基因,分别重组入pGEM-T,构建出pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEM-T-HBs中的HBs基因克隆入pQE30表达载体中,得到pQE30-HBs;再将pGEM-T-VP2中的VP2基因克隆入pQE30-HBs中,得到pQE30-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定。结果pQE30-HBs-VP2可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,Western-blot检测结果显示所表达融合蛋白均可与抗-HBs和抗-VP2结合反应。结论成功构建pQE30-HBs-VP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的HBsAg和VP2蛋白的双重抗原的反应原性。从而建立了表达B19和HBV的联合抗原表达系统,同时给HBV和B19病毒重组联合疫苗的研制和复合诊断试剂提供了抗原参考。
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