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摘要[目的]明确安徽省烟草不同种植时期烟田杂草携带烟草普通花叶病毒的情况。[方法]采集安徽省皖南烟区烟田3个不同时期的17科35种杂草，采用双抗夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）检测烟草普通花叶病毒。[结果]烟田不同时期多种杂草均携带烟草普通花叶病毒，且不同时期采集的杂草中烟草普通花叶病毒感染率分别为烟草收获期66.7%，烟田空闲期28.6%，烟草种植前期25.0%。菊科杂草带毒率较高，是该病毒的重要寄主。通过杂草汁液摩擦接种试验得出，不同时期杂草中携带的烟草普通花叶病毒均可侵染健康烟苗产生烟草花叶病，并造成危害。[结论]该研究为烟田杂草携带烟草普通花叶病毒病的综合防治提供理论依据。
关键词烟田杂草；烟草普通花叶病毒；烟草；皖南烟区
中图分类号S435.72文献标识码A文章编号0517-6611（2018）28-0137-03
Detection and Analysis of Tobacco Mosaic Virus in Main Weeds of Tobacco Fields in the South of Anhui Province
YAN Dankan1， JIANG Chaoqiang2， ZHOU Fengyan1 et al
（1. Institute of Plant Protection and AgroProducts Safety， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Heifei，Anhui 230031；2.Tobacco Research Institute， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Hefei，Anhui 230031）
Abstract[Objective] To explore the weeds infected with tobacco mosaic virus in tobacco fields of Anhui Province. [Method]We detected 35 species weeds belonging to 17 families that were collected in 3 tobacco fields in the south of Anhui Province by DASELISA method. [Result] The tobacco mosaic virus（TMV） could be infected by the tobacco mosaic virus in different periods and the TMV were detected 66.7%，28.6%and 25.0% of the samples in tobacco harvest period， tobacco field free period and tobacco planting period， respectively. The most species of the detected weeds were infected by TMV belong to the weeds of the composite family. Healthy tobacco seedling could be infected by TMV through the mechanical friction of the juice of the infected weeds by TMV. [Conclusion] The results provide the theoretical basis for integrative control of tobacco mosaic virus.
Key wordsWeeds in tobacco fields；Tobacco mosaic virus；Tobacco；The south of Anhui Province
煙草普通花叶病毒是引起烟草花叶病的主要病原，其危害造成烟叶品质下降，产量降低[1-2]。烟草普通花叶病毒的检测主要包括生物学检测方法[3]、电镜检测方法[4]、血清学检测方法[5]和分子生物学检测方法[6]。烟草普通花叶病毒寄主范围广泛，在多种植物上均可寄生[7-8]，而杂草是一类烟田中普遍存在的有害生物，目前研究集中于田间杂草的种类、危害[7-8]和防治方法[9-10]，以及杂草携带病毒的调查[11-12]，但烟田不同种植时期杂草携带病毒情况，杂草中所携带病毒是否对杂草造成危害，对烟草种植是否产生影响尚不清楚。笔者对采自安徽主要烟区的杂草进行病毒检测，以期为该病毒的防治提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
供试烟草品种为云烟87，由安徽省农业科学院烟草研究所提供。
1.2杂草样本采集
在烟草种植的3个关键时期（2015年7月烟草收获期、2016年1月烟田空闲期、2016年3月烟草种植期），分别对皖南烟区烟田杂草进行采集。将采集的杂草用样品袋装好并做好记录带回室内存放于-20 ℃冰箱内，用于病毒检测。
1.3杂草样本鉴定
将采集到的杂草进行种类鉴定[13]，选取部分杂草叶片进行检测。
采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）[14]病毒检测血清试剂盒（美国阿格迪（agdia）公司）。选取的目标病毒为烟草普通花叶病毒（TMV）。
1.4接种方法
2016年3月25日移栽健康烟苗，4月8日使用杂草汁液对烟株进行烟草普通花叶病毒接种，2016年4月26日观察结果、取样并检测。采用汁液摩擦接种方法分别接种，以患烟草普通花叶病的烟叶为阳性对照，接种前将携带烟草普通花叶病毒的杂草和烟草各100 g，放入已消毒的研磨袋中，加入 100 mL超纯水研磨，吸取汁液用于接种，每个重复接种2株烟。烟株管理措施按优质烤烟栽培生产技术规范，每次浇水和施肥均认真消毒，避免交叉感染。 2结果与分析
2.1不同时期杂草烟草普通花叶病毒检测结果
采用双抗夹心酶联免疫吸附法对皖南烟区烟田的43种杂草样本进行检测，其中包括3个关键时期，即2015年7月烟草收获期的杂草15种，2016年1月烟田空闲期的杂草7种，2016年3月烟草种植期的杂草21种。检测结果表明，烟草收获期烟草普通花叶病毒感染率最高为66.7%，其次为烟田空闲期的烟草普通花叶病毒感染率28.6%，烟草种植期烟草普通花叶病毒感染率最低为25.0%（表1）。
2.2不同种类杂草烟草普通花叶病毒检测结果
所采集杂草共17科35种，不同时期杂草种类差异较大，烟草普通花叶病毒的感染率也有所不同。烟草收获期烟田杂草包括8科15种杂草，其中菊科6种，且全部携带烟草普通花叶病毒，是此时期该病毒的主要寄主。此外，蓼科的酸模叶蓼、莎草科的黄颖莎草、桑科的构树、唇形科的荔枝草均检出烟草普通花叶病毒，而禾本科的3种杂草未检出。烟田空闲期为冬季，烟田杂草数量较少，所采集7种杂草分布于5个科，其中菊科鼠麴草中检出烟草普通花叶病毒。烟草种植期的杂草最多，包括14个科20种杂草。菊科4种，其中3种携带烟草普通花叶病毒，是该时期病毒的主要寄主，此外禾本科看麦娘和牻牛儿苗科野老鹳也检测出该病毒（表1）。
2.3不同时期杂草携带烟草普通花叶病毒的致病性检测结果
分别选取不同时期携带烟草普通花叶病毒的杂草进行接种，包括烟草收获期唇形科荔枝草、烟田空闲期菊科鼠麴草和烟草种植期菊科小飞蓬，表明接种携带烟草普通花叶病毒的杂草汁液可以造成烟苗感染烟草普通花叶病毒，表现花叶病毒病症状，且通过双抗体夹心酶联免疫吸附法病毒检测接种烟草叶片为阳性，这表明不同时期携带烟草普通花叶病毒的杂草均具有致病性（图1）。
3结论与讨论
该研究通过对安徽省池州市东至县烟草田不同种植时期17科35种杂草的烟草普通花叶病毒的血清学（ELISA）检测，结果发现烟田不同种植期的杂草中均携带烟草普通花叶病毒，且该病毒在菊科、蓼科、莎草科、桑科、唇形科、禾本科和牻牛儿苗科杂草中均有携带，表明该病毒在烟田杂草中存在时间长，杂草寄主广泛。此外，烟田不同种植时期之间带毒率存在显著差异，其中烟草收获期的带毒率最高，这可能与烟田收获后，烟秆还田增加了烟田中普通花叶病毒基数，导致杂草带毒率高。对该试验检测结果进一步分析发现，不同杂草之间带毒率存在差异，其中菊科杂草种类最多，且带毒率最高。通过携带烟草普通花叶病毒的杂草汁液摩擦接种健康烟草，发现烟草不同种植时期的烟田杂草中携带的烟草普通花叶病毒均具有侵染性，可以侵染健康烟苗，影响烟草品质。
该研究结果表明，烟草不同种植时期的多种烟田杂草是烟草普通花叶病毒的中间寄主，且杂草中的病毒可以侵染健康烟苗，造成危害。因此，及时清除田间杂草，不仅可以减轻杂草本身危害，还可以减轻田间病毒病原数量，从而达到减轻烟田烟草普通花叶病毒病危害的目的。但不同时期烟田杂草带毒率存在差异，防控杂草以减轻病毒病的发生程度，仍需要进一步研究。
46卷28期严丹侃等皖南烟区不同时期杂草中烟草普通花叶病毒检测与分析
参考文献
[1] 陈瑞泰，朱贤朝，王智发，等.全国16个主产烟省（区）烟草侵染性病害调研报告[J].中国烟草科学，1997（4）：1-7.
[2] 马国胜，何博如.烟草病毒研究现状与展望[J].中国生态农业学报，2006，14（2）：150-153.
[3] 王劲波，王凤龙，钱玉梅，等.山东烟区主要病毒的株系鉴定[J].中国烟草学报，1998，4（1）：24-31.
[4] 张仲凯，李彦刚，方琦，等.应用电子显微镜技术检测云南省烟草病毒病原[J].华南农业大学学报，1992（S1）：27-29.
[5] 梁训生.植物病毒血清学技术[M].北京：农业出版社，1985：123-134.
[6] 罗朝鹏，杨军，金立锋，等.烟草花叶病毒病的分子鉴定[J].烟草科技，2010，49（7）：58-61.
[7] 朱建义，李斌，曾庆宾，等.四川省攀西烟田杂草种类、危害及出苗规律[J].中国烟草科学，2015（4）：91-95.
[8] 李锡宏，李儒海，褚世海，等.湖北省十堰市煙田杂草的种类与分布[J].中国烟草科学，2012（4）：55-59.
[9] 刘贯山，陈其锋.烟田除草地膜的研制及防除杂草的效果[J].中国烟草科学，1999（3）：23-26.
[10] 陈溪明，林祥永，王金文，等.银灰膜、配色膜覆盖栽培对烟田杂草控制效果及烟草产质量影响的初步研究[J].中国烟草科学，2000，21（3）：43-45.
[11] 何永福，王楠，叶照春，等.贵州省烟田杂草主要病毒检测及分析[J].杂草科学，2013，31（1）：15-19.
[12] 杨雨环，李鸿波，叶照春，等.安顺市烟田杂草主要病毒检测及分析[J].耕作与栽培，2014（6）：19-21.
[13] 李扬汉.中国杂草志[M].北京：中国农业出版社，1998.
[14] 田波.植物病毒研究方法[M].北京：科学出版社，1987.
关键词烟田杂草；烟草普通花叶病毒；烟草；皖南烟区
中图分类号S435.72文献标识码A文章编号0517-6611（2018）28-0137-03
Detection and Analysis of Tobacco Mosaic Virus in Main Weeds of Tobacco Fields in the South of Anhui Province
YAN Dankan1， JIANG Chaoqiang2， ZHOU Fengyan1 et al
（1. Institute of Plant Protection and AgroProducts Safety， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Heifei，Anhui 230031；2.Tobacco Research Institute， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Hefei，Anhui 230031）
Abstract[Objective] To explore the weeds infected with tobacco mosaic virus in tobacco fields of Anhui Province. [Method]We detected 35 species weeds belonging to 17 families that were collected in 3 tobacco fields in the south of Anhui Province by DASELISA method. [Result] The tobacco mosaic virus（TMV） could be infected by the tobacco mosaic virus in different periods and the TMV were detected 66.7%，28.6%and 25.0% of the samples in tobacco harvest period， tobacco field free period and tobacco planting period， respectively. The most species of the detected weeds were infected by TMV belong to the weeds of the composite family. Healthy tobacco seedling could be infected by TMV through the mechanical friction of the juice of the infected weeds by TMV. [Conclusion] The results provide the theoretical basis for integrative control of tobacco mosaic virus.
Key wordsWeeds in tobacco fields；Tobacco mosaic virus；Tobacco；The south of Anhui Province
煙草普通花叶病毒是引起烟草花叶病的主要病原，其危害造成烟叶品质下降，产量降低[1-2]。烟草普通花叶病毒的检测主要包括生物学检测方法[3]、电镜检测方法[4]、血清学检测方法[5]和分子生物学检测方法[6]。烟草普通花叶病毒寄主范围广泛，在多种植物上均可寄生[7-8]，而杂草是一类烟田中普遍存在的有害生物，目前研究集中于田间杂草的种类、危害[7-8]和防治方法[9-10]，以及杂草携带病毒的调查[11-12]，但烟田不同种植时期杂草携带病毒情况，杂草中所携带病毒是否对杂草造成危害，对烟草种植是否产生影响尚不清楚。笔者对采自安徽主要烟区的杂草进行病毒检测，以期为该病毒的防治提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
供试烟草品种为云烟87，由安徽省农业科学院烟草研究所提供。
1.2杂草样本采集
在烟草种植的3个关键时期（2015年7月烟草收获期、2016年1月烟田空闲期、2016年3月烟草种植期），分别对皖南烟区烟田杂草进行采集。将采集的杂草用样品袋装好并做好记录带回室内存放于-20 ℃冰箱内，用于病毒检测。
1.3杂草样本鉴定
将采集到的杂草进行种类鉴定[13]，选取部分杂草叶片进行检测。
采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）[14]病毒检测血清试剂盒（美国阿格迪（agdia）公司）。选取的目标病毒为烟草普通花叶病毒（TMV）。
1.4接种方法
2016年3月25日移栽健康烟苗，4月8日使用杂草汁液对烟株进行烟草普通花叶病毒接种，2016年4月26日观察结果、取样并检测。采用汁液摩擦接种方法分别接种，以患烟草普通花叶病的烟叶为阳性对照，接种前将携带烟草普通花叶病毒的杂草和烟草各100 g，放入已消毒的研磨袋中，加入 100 mL超纯水研磨，吸取汁液用于接种，每个重复接种2株烟。烟株管理措施按优质烤烟栽培生产技术规范，每次浇水和施肥均认真消毒，避免交叉感染。 2结果与分析
2.1不同时期杂草烟草普通花叶病毒检测结果
采用双抗夹心酶联免疫吸附法对皖南烟区烟田的43种杂草样本进行检测，其中包括3个关键时期，即2015年7月烟草收获期的杂草15种，2016年1月烟田空闲期的杂草7种，2016年3月烟草种植期的杂草21种。检测结果表明，烟草收获期烟草普通花叶病毒感染率最高为66.7%，其次为烟田空闲期的烟草普通花叶病毒感染率28.6%，烟草种植期烟草普通花叶病毒感染率最低为25.0%（表1）。
2.2不同种类杂草烟草普通花叶病毒检测结果
所采集杂草共17科35种，不同时期杂草种类差异较大，烟草普通花叶病毒的感染率也有所不同。烟草收获期烟田杂草包括8科15种杂草，其中菊科6种，且全部携带烟草普通花叶病毒，是此时期该病毒的主要寄主。此外，蓼科的酸模叶蓼、莎草科的黄颖莎草、桑科的构树、唇形科的荔枝草均检出烟草普通花叶病毒，而禾本科的3种杂草未检出。烟田空闲期为冬季，烟田杂草数量较少，所采集7种杂草分布于5个科，其中菊科鼠麴草中检出烟草普通花叶病毒。烟草种植期的杂草最多，包括14个科20种杂草。菊科4种，其中3种携带烟草普通花叶病毒，是该时期病毒的主要寄主，此外禾本科看麦娘和牻牛儿苗科野老鹳也检测出该病毒（表1）。
2.3不同时期杂草携带烟草普通花叶病毒的致病性检测结果
分别选取不同时期携带烟草普通花叶病毒的杂草进行接种，包括烟草收获期唇形科荔枝草、烟田空闲期菊科鼠麴草和烟草种植期菊科小飞蓬，表明接种携带烟草普通花叶病毒的杂草汁液可以造成烟苗感染烟草普通花叶病毒，表现花叶病毒病症状，且通过双抗体夹心酶联免疫吸附法病毒检测接种烟草叶片为阳性，这表明不同时期携带烟草普通花叶病毒的杂草均具有致病性（图1）。
3结论与讨论
该研究通过对安徽省池州市东至县烟草田不同种植时期17科35种杂草的烟草普通花叶病毒的血清学（ELISA）检测，结果发现烟田不同种植期的杂草中均携带烟草普通花叶病毒，且该病毒在菊科、蓼科、莎草科、桑科、唇形科、禾本科和牻牛儿苗科杂草中均有携带，表明该病毒在烟田杂草中存在时间长，杂草寄主广泛。此外，烟田不同种植时期之间带毒率存在显著差异，其中烟草收获期的带毒率最高，这可能与烟田收获后，烟秆还田增加了烟田中普通花叶病毒基数，导致杂草带毒率高。对该试验检测结果进一步分析发现，不同杂草之间带毒率存在差异，其中菊科杂草种类最多，且带毒率最高。通过携带烟草普通花叶病毒的杂草汁液摩擦接种健康烟草，发现烟草不同种植时期的烟田杂草中携带的烟草普通花叶病毒均具有侵染性，可以侵染健康烟苗，影响烟草品质。
该研究结果表明，烟草不同种植时期的多种烟田杂草是烟草普通花叶病毒的中间寄主，且杂草中的病毒可以侵染健康烟苗，造成危害。因此，及时清除田间杂草，不仅可以减轻杂草本身危害，还可以减轻田间病毒病原数量，从而达到减轻烟田烟草普通花叶病毒病危害的目的。但不同时期烟田杂草带毒率存在差异，防控杂草以减轻病毒病的发生程度，仍需要进一步研究。
46卷28期严丹侃等皖南烟区不同时期杂草中烟草普通花叶病毒检测与分析
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[2] 马国胜，何博如.烟草病毒研究现状与展望[J].中国生态农业学报，2006，14（2）：150-153.
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[6] 罗朝鹏，杨军，金立锋，等.烟草花叶病毒病的分子鉴定[J].烟草科技，2010，49（7）：58-61.
[7] 朱建义，李斌，曾庆宾，等.四川省攀西烟田杂草种类、危害及出苗规律[J].中国烟草科学，2015（4）：91-95.
[8] 李锡宏，李儒海，褚世海，等.湖北省十堰市煙田杂草的种类与分布[J].中国烟草科学，2012（4）：55-59.
[9] 刘贯山，陈其锋.烟田除草地膜的研制及防除杂草的效果[J].中国烟草科学，1999（3）：23-26.
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[11] 何永福，王楠，叶照春，等.贵州省烟田杂草主要病毒检测及分析[J].杂草科学，2013，31（1）：15-19.
[12] 杨雨环，李鸿波，叶照春，等.安顺市烟田杂草主要病毒检测及分析[J].耕作与栽培，2014（6）：19-21.
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