【摘 要】
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目的 观察小鼠成纤维细胞株3T3来源的外泌小体(exosome)对小鼠结直肠癌细胞CT26增殖能力的影响,并探讨其机制.方法 通过PureExo exosome提取试剂盒提取3T3细胞培养基上清中的
【机 构】
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430071 武汉大学中南医院普外科同济咸宁医院肝胆胰胃肠外科;430071,武汉大学中南医院普外科;同济咸宁医院肝胆胰胃肠外科;
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目的 观察小鼠成纤维细胞株3T3来源的外泌小体(exosome)对小鼠结直肠癌细胞CT26增殖能力的影响,并探讨其机制.方法 通过PureExo exosome提取试剂盒提取3T3细胞培养基上清中的exosome,按照不同浓度及时间作用于CT26细胞,并利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测CT26细胞增殖能力,碘化丙锭(PI)染色法检测细胞周期改变,Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CT26中DNA甲基转移酶1(DNMT1)及抑癌基因p16的蛋白及mRNA表达.结果 CCK-8实验中450 nm处吸光度(A)值96 h时,exosome处理组(10 mg/L:1.17±0.04,50 mg/L:1.69±0.03,200 mg/L:2.08 ±0.05),显著高于对照组(Control):0.89 ±0.03,即随着exosome处理浓度的提高,CT26细胞增殖逐渐增快;同时细胞周期进程加快,表现为处于S期及G2/M期的细胞比例增多,处于G0/G1期比例减少.而Western blot提示调控DNA甲基化的重要蛋白DNMT1明显增多,同时伴有其下游蛋白及细胞增殖、周期相关的分子如p16、p21、细胞周期素(Cyclin) D1和CDK6的水平变化,RT-qPCR也验证了上述分子mRNA水平的变化.结论 小鼠成纤维细胞株3T3来源exosome可促进小鼠结直肠癌细胞CT26增殖,加快其细胞周期进程,并且可能通过DNMT1改变其下游分子发挥上述作用.
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