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摘要：[目的]研究猪屎豆不同部位不同提取相的黄酮含量。[方法]采用乙醇回流提取作为猪屎豆黄酮的制备方法；以芦丁为对照品，采用紫外-可见分光光度法作为黄酮的测定方法。[结果]叶片石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黄酮含量分别为14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，果实各萃取相黄酮含量分别为3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；猪屎豆叶片石油醚相、氯仿相和水相的黄酮含量显著高于果实相应的黄酮含量，果实乙酸乙酯相的黄酮含量显著高于叶片乙酸乙酯相的黄酮含量。[结论]猪屎豆叶片和果实可作为黄酮开发利用的重要来源之一。
关键词：猪屎豆；黄酮；不同部位；乙醇回流提取；紫外分光光度法
中图分类号：S567.23+9 文献标识码：A 文章编号：0517-6611（2016）07-145-02
Abstract：[Objective] To research the flavonoids content in different parts of Crotalaria pallida at different extraction phases.[Method] Flavonoids were prepared from C.pallida by ethanol reflux extraction.With rutin as the reference substances，UVVIS spectrophotometry was used as the detection method of flavonoids.[Conclusion] Flavonoids contents in C.pallida leaves in petroleum ether phase，chloroform phase，ethyl acetate phase and water phase were 14.63，92.67，8.29 and 98.80 mg/g，respectively.Flavonoids contents in C.pallida fruits were 3.24，30.54，52.15 and 59.72 mg/g，respectively.Flavonoids contents in C.pallida leaves in petroleum ether phase，chloroform phase and water phase were significantly higher than those in C.pallida fruits.Flavonoids content in C.pallida fruits in ethyl acetate phase was significantl摘要：[目的]研究猪屎豆不同部位不同提取相的黄酮含量。[方法]采用乙醇回流提取作为猪屎豆黄酮的制備方法；以芦丁为对照品，采用紫外-可见分光光度法作为黄酮的测定方法。[结果]叶片石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黄酮含量分别为14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，果实各萃取相黄酮含量分别为3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；猪屎豆叶片石油醚相、氯仿相和水相的黄酮含量显著高于果实相应的黄酮含量，果实乙酸乙酯相的黄酮含量显著高于叶片乙酸乙酯相的黄酮含量。[结论]猪屎豆叶片和果实可作为黄酮开发利用的重要来源之一。
关键词：猪屎豆；黄酮；不同部位；乙醇回流提取；紫外分光光度法
中图分类号：S567.23+9 文献标识码：A 文章编号：0517-6611（2016）07-145-02
y higher than that in C.pallida leaves.[Conclusion] C.pallida leaves and fruits were important sources for the development and utilization of flavonoids.
Key words：Crotalaria pallida； Flavonoids； Different parts； Ethanol reflux extraction； Ultraviolet spectrophotometry
黄酮类化合物的基本结构构成为CGC 方式，属于植物次级代谢产物。黄酮类化合物具有来源广、生物活性多、毒副作用小等特点，目前广泛应用于临床，可影响心血管系统、抗炎调节免疫、抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫系统调节、神经系统、生殖系统、消化系统等[1]。近年来，植物源药剂以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物更是以其光谱的药理作用引人瞩目，是当前药品、功能食品和保健品开发的重点活性物质[2]。
黄酮类化合物广泛存在于豆科植物中，但在猪屎豆属植物中仅有少量分布，主要分布在该属马都拉猪屎豆（C.Madurensis）中[3]。猪屎豆（Crotalaria pallida Aiton）是豆科（Leguminosae）猪屎豆属（Crotalaria）多年生草本，是世界广布种，原产于热带美洲，分布于大西洋海岸线、巴西、美洲、非洲及中国大部分地区，常见于路边、河边、沙地还有贫瘠的山坡[4-5]。猪屎豆具有较好的生物活性，全草有散结、清湿热等作用，近年来试用于抗肿瘤效果较好，主要对鳞状上皮癌、基底细胞癌有疗效[5]。猪屎豆生长茂密、生长速度快、花期长、结实率高[4]，每年都能采集到大量的猪屎豆叶和荚果。已有研究显示，猪屎豆叶片提取物总黄酮具有良好的抑菌活性[2]，能广泛用于杀菌剂、保鲜剂等产品的开发，但至今对果实的研究及开发利用还很缺乏，造成了极大的资源浪费。该研究对猪屎豆不同部位不同提取相的黄酮进行了含量的测定，明确果实总黄酮含量的情况，以期为果实在黄酮类功能产品方面的开发以及猪屎豆植物的进一步开发利用提供依据。 1：材料与方法
1.1：试验材料：
猪屎豆（Crotalaria pallida Ait.）叶片和果实分别于2015年12月21日采自广东省中山市陵岗村，经中山市森林资源中心蒋谦才高级工程师鉴定为豆科（Leguminosae）猪屎豆属（Crotalaria）猪屎豆的叶片和果实。采集后的叶片和果实经80 ℃干燥后粉粹备用。
1.2：仪器和试剂：旋转蒸发仪（RE30L），紫外可见分光光度仪（北京谱析TU1901），粉碎机（LD800，粉粹细度30～200目）。芦丁（上海江莱生物科技有限公司，优级纯，规格100 mg），乙醇、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯、氯仿试剂、氢氧化钠、硝酸铝均为分析纯。
1.3：试验方法
1.3.1：猪屎豆叶片提取物的制备。分别精密称取猪屎豆叶片和果实粉末200 g，分别置于1 000 mL的圆底烧瓶中，加石油醚300 mL，回流提取2 h，直至溶剂无色，挥发完样品中的石油醚，加80%乙醇300 mL进行回流提取2 h，过滤后滤渣继续用80%的乙醇回流提取1 h，合并滤液，将乙醇旋转蒸发完，得浸膏。
1.3.2：标准曲线的制作。
参考王芳等[2]、余文新等[6]方法配置芦丁标准溶液，选择合适的测定波长（500 nm）进行吸光度测定，每浓度标准溶液连续测3次。绘制芦丁的标准曲线，求出吸光度A与芦丁的标准溶液浓度之间的线性回归方程。
2：结果与方法
2.1：猪屎豆样品不同提取部位的浸膏得率：
取干燥的猪屎豆叶片样品200 g，分别利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取叶片得浸膏11 g，得率为2.75%；氯仿萃取叶片得浸膏13 g，得率为3.25%；乙酸乙酯萃取叶片得浸膏12 g，得率为3.00%；水相萃取叶片得浸膏13 g，得率为3.25%。
取干燥的猪屎豆果实样品200 g，分别利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取果实得浸膏17 g，得率为4.25%；氯仿萃取果实得浸膏18 g，得率为4.50%；乙酸乙酯萃取果实得浸膏15 g，得率为3.75%；水相萃取果实得浸膏11 g，得率为2.75%。
2.2：标准溶液浓度与吸光度值的回归方程：
由图1可见，芦丁标准溶液浓度与吸光度之间的线性回归方程为A=4.685 7x-0.010 5（R2=0.992 0），表明芦丁的质量浓度在001～0.05 mg/mL与吸光度有良好的线性关系。
2.3：各萃取相黄酮含量：按照标准曲线及其换算关系，计算猪屎豆叶片及果实提取物各部分黄酮含量，结果表明（表1），石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相叶片的黄酮含量分别为14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，各萃取相果实黄酮含量分别为3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；石油醚相、氯仿相和水相叶片的黄酮含量显著高于果实的黄酮含量（P< 0.05），乙酸乙酯相果实黄酮含量显著高于叶片黄酮含量（P<0.05）。
3：结论
该试验采用体积分数80%的乙醇，70 ℃回流提取猪屎豆叶片和果实中的有效成分，分别得到了石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黄酮含量。结果显示，叶片石油醚相黄酮含量为14.63 mg/g，氯仿相黄酮含量为92.67 mg/g，乙酸乙酯相黄酮含量为8.29 mg/g，水相黄酮含量为98.80 mg/g；果实石油醚相黄酮含量为3.24 mg/g，氯仿相黄酮含量为30.54 mg/g，乙酸乙酯相黃酮含量为52.15 mg/g，水相黄酮含量为59.72 mg/g。比较而言，猪屎豆叶片石油醚相、氯仿相和水相的黄酮含量显著高于果实相应的黄酮含量，果实乙酸乙酯相的黄酮含量显著高于叶片乙酸乙酯相的黄酮含量。
参考文献
[1] 王晓梅，曹稳根.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].宿州学院学报，2007，22（1）： 105-107.
[2] 王芳，高瑾，毛宇，等.猪屎豆叶片提取物总黄酮含量及其抑菌活性研究[J].江西农业大学学报，2014，36（4）： 861-867.
[3] YIN Z L.The study on distribution，pharmacology and analytical methods of isoflavone[J].Lishizhen Med Mat Medica Res，2003，14（3）： 178.
[4] 郭艳峰，刘妍，蒋谦才，等.先锋植物猪屎豆Crotalaria pallida自花传粉机制研究[J].广西植物 （已接收）.
[5] XU L R.Fabaceae （Leguminosae）[M]//Floral of China 10.Beijing：Science Press and St.Louis： Missouri Botanical Garden Press，2010：105-117.
[6] 余文新，邓瑞云，林励，等.檀香不同部位总黄酮含量比较[J].齐齐哈尔医学院学报，2012，33（1）： 3-4.
关键词：猪屎豆；黄酮；不同部位；乙醇回流提取；紫外分光光度法
中图分类号：S567.23+9 文献标识码：A 文章编号：0517-6611（2016）07-145-02
Abstract：[Objective] To research the flavonoids content in different parts of Crotalaria pallida at different extraction phases.[Method] Flavonoids were prepared from C.pallida by ethanol reflux extraction.With rutin as the reference substances，UVVIS spectrophotometry was used as the detection method of flavonoids.[Conclusion] Flavonoids contents in C.pallida leaves in petroleum ether phase，chloroform phase，ethyl acetate phase and water phase were 14.63，92.67，8.29 and 98.80 mg/g，respectively.Flavonoids contents in C.pallida fruits were 3.24，30.54，52.15 and 59.72 mg/g，respectively.Flavonoids contents in C.pallida leaves in petroleum ether phase，chloroform phase and water phase were significantly higher than those in C.pallida fruits.Flavonoids content in C.pallida fruits in ethyl acetate phase was significantl摘要：[目的]研究猪屎豆不同部位不同提取相的黄酮含量。[方法]采用乙醇回流提取作为猪屎豆黄酮的制備方法；以芦丁为对照品，采用紫外-可见分光光度法作为黄酮的测定方法。[结果]叶片石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黄酮含量分别为14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，果实各萃取相黄酮含量分别为3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；猪屎豆叶片石油醚相、氯仿相和水相的黄酮含量显著高于果实相应的黄酮含量，果实乙酸乙酯相的黄酮含量显著高于叶片乙酸乙酯相的黄酮含量。[结论]猪屎豆叶片和果实可作为黄酮开发利用的重要来源之一。
关键词：猪屎豆；黄酮；不同部位；乙醇回流提取；紫外分光光度法
中图分类号：S567.23+9 文献标识码：A 文章编号：0517-6611（2016）07-145-02
y higher than that in C.pallida leaves.[Conclusion] C.pallida leaves and fruits were important sources for the development and utilization of flavonoids.
Key words：Crotalaria pallida； Flavonoids； Different parts； Ethanol reflux extraction； Ultraviolet spectrophotometry
黄酮类化合物的基本结构构成为CGC 方式，属于植物次级代谢产物。黄酮类化合物具有来源广、生物活性多、毒副作用小等特点，目前广泛应用于临床，可影响心血管系统、抗炎调节免疫、抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫系统调节、神经系统、生殖系统、消化系统等[1]。近年来，植物源药剂以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物更是以其光谱的药理作用引人瞩目，是当前药品、功能食品和保健品开发的重点活性物质[2]。
黄酮类化合物广泛存在于豆科植物中，但在猪屎豆属植物中仅有少量分布，主要分布在该属马都拉猪屎豆（C.Madurensis）中[3]。猪屎豆（Crotalaria pallida Aiton）是豆科（Leguminosae）猪屎豆属（Crotalaria）多年生草本，是世界广布种，原产于热带美洲，分布于大西洋海岸线、巴西、美洲、非洲及中国大部分地区，常见于路边、河边、沙地还有贫瘠的山坡[4-5]。猪屎豆具有较好的生物活性，全草有散结、清湿热等作用，近年来试用于抗肿瘤效果较好，主要对鳞状上皮癌、基底细胞癌有疗效[5]。猪屎豆生长茂密、生长速度快、花期长、结实率高[4]，每年都能采集到大量的猪屎豆叶和荚果。已有研究显示，猪屎豆叶片提取物总黄酮具有良好的抑菌活性[2]，能广泛用于杀菌剂、保鲜剂等产品的开发，但至今对果实的研究及开发利用还很缺乏，造成了极大的资源浪费。该研究对猪屎豆不同部位不同提取相的黄酮进行了含量的测定，明确果实总黄酮含量的情况，以期为果实在黄酮类功能产品方面的开发以及猪屎豆植物的进一步开发利用提供依据。 1：材料与方法
1.1：试验材料：
猪屎豆（Crotalaria pallida Ait.）叶片和果实分别于2015年12月21日采自广东省中山市陵岗村，经中山市森林资源中心蒋谦才高级工程师鉴定为豆科（Leguminosae）猪屎豆属（Crotalaria）猪屎豆的叶片和果实。采集后的叶片和果实经80 ℃干燥后粉粹备用。
1.2：仪器和试剂：旋转蒸发仪（RE30L），紫外可见分光光度仪（北京谱析TU1901），粉碎机（LD800，粉粹细度30～200目）。芦丁（上海江莱生物科技有限公司，优级纯，规格100 mg），乙醇、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯、氯仿试剂、氢氧化钠、硝酸铝均为分析纯。
1.3：试验方法
1.3.1：猪屎豆叶片提取物的制备。分别精密称取猪屎豆叶片和果实粉末200 g，分别置于1 000 mL的圆底烧瓶中，加石油醚300 mL，回流提取2 h，直至溶剂无色，挥发完样品中的石油醚，加80%乙醇300 mL进行回流提取2 h，过滤后滤渣继续用80%的乙醇回流提取1 h，合并滤液，将乙醇旋转蒸发完，得浸膏。
1.3.2：标准曲线的制作。
参考王芳等[2]、余文新等[6]方法配置芦丁标准溶液，选择合适的测定波长（500 nm）进行吸光度测定，每浓度标准溶液连续测3次。绘制芦丁的标准曲线，求出吸光度A与芦丁的标准溶液浓度之间的线性回归方程。
2：结果与方法
2.1：猪屎豆样品不同提取部位的浸膏得率：
取干燥的猪屎豆叶片样品200 g，分别利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取叶片得浸膏11 g，得率为2.75%；氯仿萃取叶片得浸膏13 g，得率为3.25%；乙酸乙酯萃取叶片得浸膏12 g，得率为3.00%；水相萃取叶片得浸膏13 g，得率为3.25%。
取干燥的猪屎豆果实样品200 g，分别利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取果实得浸膏17 g，得率为4.25%；氯仿萃取果实得浸膏18 g，得率为4.50%；乙酸乙酯萃取果实得浸膏15 g，得率为3.75%；水相萃取果实得浸膏11 g，得率为2.75%。
2.2：标准溶液浓度与吸光度值的回归方程：
由图1可见，芦丁标准溶液浓度与吸光度之间的线性回归方程为A=4.685 7x-0.010 5（R2=0.992 0），表明芦丁的质量浓度在001～0.05 mg/mL与吸光度有良好的线性关系。
2.3：各萃取相黄酮含量：按照标准曲线及其换算关系，计算猪屎豆叶片及果实提取物各部分黄酮含量，结果表明（表1），石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相叶片的黄酮含量分别为14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，各萃取相果实黄酮含量分别为3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；石油醚相、氯仿相和水相叶片的黄酮含量显著高于果实的黄酮含量（P< 0.05），乙酸乙酯相果实黄酮含量显著高于叶片黄酮含量（P<0.05）。
3：结论
该试验采用体积分数80%的乙醇，70 ℃回流提取猪屎豆叶片和果实中的有效成分，分别得到了石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黄酮含量。结果显示，叶片石油醚相黄酮含量为14.63 mg/g，氯仿相黄酮含量为92.67 mg/g，乙酸乙酯相黄酮含量为8.29 mg/g，水相黄酮含量为98.80 mg/g；果实石油醚相黄酮含量为3.24 mg/g，氯仿相黄酮含量为30.54 mg/g，乙酸乙酯相黃酮含量为52.15 mg/g，水相黄酮含量为59.72 mg/g。比较而言，猪屎豆叶片石油醚相、氯仿相和水相的黄酮含量显著高于果实相应的黄酮含量，果实乙酸乙酯相的黄酮含量显著高于叶片乙酸乙酯相的黄酮含量。
参考文献
[1] 王晓梅，曹稳根.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].宿州学院学报，2007，22（1）： 105-107.
[2] 王芳，高瑾，毛宇，等.猪屎豆叶片提取物总黄酮含量及其抑菌活性研究[J].江西农业大学学报，2014，36（4）： 861-867.
[3] YIN Z L.The study on distribution，pharmacology and analytical methods of isoflavone[J].Lishizhen Med Mat Medica Res，2003，14（3）： 178.
[4] 郭艳峰，刘妍，蒋谦才，等.先锋植物猪屎豆Crotalaria pallida自花传粉机制研究[J].广西植物 （已接收）.
[5] XU L R.Fabaceae （Leguminosae）[M]//Floral of China 10.Beijing：Science Press and St.Louis： Missouri Botanical Garden Press，2010：105-117.
[6] 余文新，邓瑞云，林励，等.檀香不同部位总黄酮含量比较[J].齐齐哈尔医学院学报，2012，33（1）： 3-4.