观察长期高氧暴露对新生小鼠肺微血管发育及Ephrin-B2表达的影响。
方法2日龄昆明小鼠48只,随机分为高氧组和空气组,每组24只。高氧组采用吸入70%浓度氧气制作新生小鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型。于3、7、14、21日龄每组各处死6只小鼠。取肺组织,HE染色观察肺组织病理变化,行辐射状肺泡计数,CD34免疫组织化学染色观察微血管情况,并计数微血管数量。采用肺组织免疫组织化学染色检测Ephrin-B2表达定位及其光密度,同时采用实时荧光定量-聚合酶链反应技术和Western印迹技术检测Ephrin-B2mRNA和蛋白表达水平。采用两独立样本t检验进行统计学分析。
结果(1)肺组织病理及辐射状肺泡计数和微血管密度:随日龄增加,高氧组小鼠肺组织渐呈典型的BPD样改变,主要表现为肺泡发育简化,肺微血管数量减少。高氧组14日龄时辐射状肺泡计数和微血管密度均显著低于空气组[(6.067±0.432)与(6.950±0.243)个,t=4.365,P<0.05;4.133±0.476与4.867±0.472,t=2.680,P<0.01],21日龄时降低更加明显[(8.050±0.362)与(9.817±0.487)个,t=7.127,P<0.05;4.333±0.532与6.017±0.937,t=3.828,P<0.01]。(2)Ephrin-B2蛋白定位及表达强度:Ephrin-B2主要表达于肺泡上皮细胞,肺泡间隔亦有少许表达。高氧组7、14和21日龄Ephrin-B2表达强度(平均光密度)分别为0.146±0.013、0.140±0.007和0.138±0.008,均低于空气组(分别为0.153±0.009、0.161±0.006和0.166±0.009,t值分别为-2.049、-9.442和-10.087,P值均<0.05)。(3)Ephrin-B2 mRNA和蛋白含量:高氧组Ephrin-B2 mRNA在14和21日龄时明显低于空气组(0.65±0.14与1.05±0.16,0.57±0.09与1.13±0.18,t值分别为4.609和6.816,P值均<0.01);高氧组Ephrin-B2蛋白含量(相对灰度值)在21日龄时低于空气组(0.13±0.03与0.29±0.08,t=4.587,P<0.01)。
结论高氧诱导BPD模型鼠存在肺泡简化和微血管受损,同时Ephrin-B2表达降低,Ephrin-B2受损可能在BPD的发病机制中扮演重要角色。