【摘 要】
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目的研究HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)的纯化工艺,并建立质控标准。方法对工程菌(DH5α/pcDNA3.1-pp65)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析(依次为分子筛层
【机 构】
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合肥安徽医科大学微生物学教研室教育部“重要遗传疾病基因资源利用”重点实验室(省部共建)
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目的研究HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)的纯化工艺,并建立质控标准。方法对工程菌(DH5α/pcDNA3.1-pp65)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8-0
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