【摘 要】
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目的探讨上调microRNA-125a(miR-125a)对肺癌A549细胞凋亡的影响及可能机制。方法人工合成miR-125a基因序列,将miR-125a基因克隆至真核表达载体pGenesil-1质粒,构建重组质粒p
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目的探讨上调microRNA-125a(miR-125a)对肺癌A549细胞凋亡的影响及可能机制。方法人工合成miR-125a基因序列,将miR-125a基因克隆至真核表达载体pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-miR-125a,同时设计并构建阴性对照质粒pGenesil-control。将以上载体经脂质体介导转染肺癌A549细胞并分为3组:成功转染pGenesil-miR-125a的A549细胞(A549-miR-125a组),成功转染pGenesil-control的A549细胞(A549-control组),以及未进行转染的A549细胞(A549组)。采用实时定量PCR技术(QPCR)检测各组细胞的miR-125a表达水平,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法检测p53基因的蛋白水平。结果经酶切和测序鉴定证明pGenesil-miR-125a重组质粒构建成功。A549-miR-125a组的miR-125a水平为2.72±0.41,高于A549-control组的0.97±0.16和A549组的0.96±0.11(P<0.01);A549-miR-125a组的细胞凋亡率为(31.04±2.48)%,高于A549-control组的(6.91±0.72)%和A549组的(6.73±0.56)%(P<0.05);A549-miR-125a组的p53蛋白水平为3.91±0.46,高于A549-control组的1.01±0.06和A549组的0.99±0.04(P<0.01)。结论上调miR-125a可促进肺癌细胞的凋亡,提示其在肺癌的发生、发展中有重要作用,可能的机制是上调p53的蛋白表达。
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