【摘 要】
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根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFN-α、-β、-γ)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建
【机 构】
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华南农业大学兽医学院农业部动物重大疫病防控重点开放实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(30771612)
论文部分内容阅读
根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFN-α、-β、-γ)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将IFN-α、-β、-γ基因克隆至pGEM-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IFN-α、-β、-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102~1×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.990。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4 h。建立的鸡IFN-α、-β、-γ基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础。
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