【摘 要】
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为构建猪hepcidin毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌型表达栽体,实现其真核表达,本文采用RT - PCR方法获得猪肝脏中的铁代谢调节基因hepcidin,通过连接酶使其与真核表达栽体pGAP
【机 构】
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河南农业大学 牧医工程学院,南饲料微生物工程技术研究中心,河南饲料微生物工程技术研究中心
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为构建猪hepcidin毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌型表达栽体,实现其真核表达,本文采用RT - PCR方法获得猪肝脏中的铁代谢调节基因hepcidin,通过连接酶使其与真核表达栽体pGAPZaA相连构建重组表达质粒pGAPZaA - hepcidin.利用高压电击处理,使质粒栽体转入到毕赤酵母中,用含Zeocin抗生素的YPD平板筛选阳性转化子,并做PCR鉴定.结果表明:hepcidin基因准确地插入表达载体pGAPZaA,并已整合到酵母基因组中,并成功构建了酵母重组表达质粒.
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