【摘 要】
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目的:探讨激光共聚焦显微镜不同参数对活细胞荧光漂白的影响.方法:采用不同的激光共聚焦显微镜拍摄参数对钙黄绿素标记的骨肉瘤细胞进行时间序列成像,分析随拍摄帧数增多荧光强度的变化.结果:激光功率增大、激光驻留时间延长都会增加荧光漂白,当保持激光驻留时间与激光强度的乘积(即照射在样品上的总能量)不变时,驻留时间最长的组荧光漂白率最高(P<0.05),驻留时间最短的组荧光漂白率最低(P<0.05);NA值相似的情况下,20倍物镜结合ZOOM=2的模式比直接用40倍物镜拍摄荧光漂白率更高;细胞在氧含量3％的培养条件
【机 构】
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中山大学附属第七医院营养科,广东 深圳518107;四川大学华西医院骨科,四川 成都610041;四川大学华西医院 公共实验技术中心病理与图像技术平台,四川 成都610041
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目的:探讨激光共聚焦显微镜不同参数对活细胞荧光漂白的影响.方法:采用不同的激光共聚焦显微镜拍摄参数对钙黄绿素标记的骨肉瘤细胞进行时间序列成像,分析随拍摄帧数增多荧光强度的变化.结果:激光功率增大、激光驻留时间延长都会增加荧光漂白,当保持激光驻留时间与激光强度的乘积(即照射在样品上的总能量)不变时,驻留时间最长的组荧光漂白率最高(P<0.05),驻留时间最短的组荧光漂白率最低(P<0.05);NA值相似的情况下,20倍物镜结合ZOOM=2的模式比直接用40倍物镜拍摄荧光漂白率更高;细胞在氧含量3％的培养条件中预处理1 h,与常规培养条件比,在拍摄早期加剧光漂白,在拍摄后期延缓光漂白.结论:对活细胞进行三维重建或时间序列成像时,建议先通过预试验找到光漂白率最小且同时满足分辨率需求的拍摄参数组合,可以考虑高激光功率、短驻留时间的组合;非必须情况,尽量避免使用ZOOM模式;如何利用低氧条件缓解对活细胞的光漂白尚需进一步探索.
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