首先对影响葡萄糖磷酸变位酶(PGM)稳定性的因素进行了比较研究,结果发现,在所有被检测的因子中,磷酸根对酶的保护作用最强,而Tris-盐酸则效果极差.在磷酸缓冲液中添加二硫苏糖醇、PMSF、葡萄糖和镁离子等可能的保持试剂未能进一步提高酶的稳定性.另外,pH对PGM酶的稳定性有较大影响,酸性pH不利于酶活性的保持,在pH8.0时酶最为稳定.因此,本实验对PGM同工酶的纯化均在pH8.0的磷酸缓冲液中进行.依次经过抽提、分步硫酸铵沉淀、Sephadex G75柱层析以及二乙氨乙基纤维素柱高效液相色谱(DEAE-HPLC)等分离步骤,我们纯化了大白菜品种“白阳”黄化种苗中的3个葡萄糖磷酸变位酶(PGM)同工酶,并分别测定了同耐热相关PGM同工酶和与其自然电泳迁移率相近的另一同工酶的米氏常数(Km),比较了它们对37℃热处理的稳定性.结果表明,在米氏常数和热稳定性方面它们没有显著差别,因而推测PGM酶本身可能不是影响大白菜耐热性的主要因素.