论文部分内容阅读
目的 选择从人脐带血中分离出的间充质干细胞(UCB1-MSCs),通过5-氮胞苷(5-aza)进行诱导,对其体外向心肌细胞转分化的能力做初步探讨. 方法培养第11代hMSCs,加入6、9、12 μmol/L的5-aza分别作用24 h和48 h,相差显微镜观察细胞形态直到3周后实验结束.以未经处理的细胞为对照组.采用RT-PCR检测心肌转录因子MEF2C、GATA4、Nkx2.5和心肌特异性基因MLC-2v、MLC-2a、Connexin 43及α-actinin的表达;免疫荧光染色检测Connexin 43和α-actinin的表达,以共聚焦显微镜成像. 结果经5-aza诱导后观察3周未见细胞的自发搏动.诱导前后的hMSC均可不同程度的表达MEF2C、Connexin 43及α-actinin.在12 μmol/L水平诱导24 h和6、9、12 μmol/L水平诱导48 h共4个组中可见MLC-2 a的表达.GATA4 、Nkx 2.5和MLC-2 v在诱导前后均未见表达.免疫荧光染色显示诱导前后hMSCs的胞浆内存在散在排列无序的α-actinin和Connexin 43荧光,而始终未见肌小节结构. 结论经5-aza诱导UCB 来源hMSCs在基因水平可以表达部分心肌特异性基因,但是在诱导后的一个月时间内未见相应的心肌特异性结构出现,此类细胞向心肌细胞转分化的能力需再证实.