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摘要：于阳桃园和番石榴园，田间测定了不同浓度啤酒废酵母酶解蛋白与硼砂组合对橘小实蝇的诱捕和诱杀效果。结果表明：在诱捕和诱杀试验中，随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加，酶解蛋白硼砂组合对橘小实蝇的捕杀数量呈逐渐增加趋势，以25 g/L蛋白、0.09 mol/L硼砂组合最高。通过诱捕和诱杀试验确定啤酒废酵母酶解蛋白的最佳田间使用浓度为20～25 g/L，硼砂的添加量为0.06～0.12 mol/L。
关键词：啤酒废酵母；硼砂；蛋白诱剂；增效作用；橘小实蝇
中图分类号：Q965.9：Q969.456.8 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2013）08-0110-03
橘小实蝇（Bactrocera dorsalis Hendel），属双翅目（Diptera）实蝇科（Tetriphitidae），是柑橘、阳桃、芒果、番石榴等250余种果树的毁灭性害虫[1～3]，蛋白诱杀是一项非常有效的防治措施。杜迎刚等用啤酒废酵母酶解制备出了在pH 8.5条件下对橘小实蝇具有很好引诱活性的蛋白诱剂[4，5]。本文对不同浓度啤酒废酵母酶解蛋白与硼砂组合后对橘小实蝇的田间诱捕和诱杀情况进行了研究，旨在为此蛋白的田间使用浓度范围及增效物质的研究提供依据。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1主要试剂木瓜蛋白酶（BR）：98万单位（北京双旋微生物培养基制品厂）；硼砂（AR）：安徽萧县化学试剂厂；蛋白诱剂：参照杜迎刚（2007）[4] 方法自制；杀虫介质：48%的Spinosad（多杀霉素）悬浮剂（美国陶氏益农公司）。
1.1.2仪器设备酸度计：PHS-3B（上海虹益仪器仪表有限公司）；电子天平：BS 124S（德国Sartorius）；移液器：德产Tripette；诱捕器：江苏常州禾丰生化研究所生产的橘小实蝇专用诱捕器。
1.2试验方法
1.2.1诱捕试验于福州武警福建总队食品生产基地及漳州热作所分别选择阳桃和番石榴园作为试验点。取新制备的啤酒废酵母酶解蛋白母液，稀释成不同浓度后加入不同浓度的硼砂溶液制成蛋白诱剂组合（具体组合见表1），以不加硼砂的20 g/L[1]啤酒废酵母酶解液为对照。每种诱剂组合重复12次，两地阳桃园、番石榴园各3次。每个诱捕器加一种供试溶液200 ml，挂于田间树上高1.5 m阴凉处。隔天统计引诱的雌雄实蝇数量并补水至200 ml，连续观察记录2周。
1.2.2诱杀试验棋盘式取样，选择周围环境和长势基本一致的株距20 m以上的番石榴28株，分7组。在树体离地面1.5 m处于叶背面喷硼砂与酶解蛋白诱剂组合50 ml（内加Spinosad 80 mg/L[1，6]；组合选择是在1.2.1试验的基础上，具体见表2），以不加硼砂的20 g/L蛋白诱剂为对照。每组4株分别喷4个方位，喷洒树体面积约1.5 m2，每株地面铺白色布，早晚各观察清理死虫1次，记录1周内引诱的雌雄橘小实蝇数量。
1.2.3数据分析方法数据处理用DPS v3.01统计分析软件，采用单因子方差分析对试验数据进行分析，方差检验用Duncan’s新复极差法进行。
2结果与分析
2.1诱捕试验从表1可以看出，随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加，酶解蛋白硼砂组合对橘小实蝇的诱捕数量逐渐增加，以25 g/L蛋白/0.09 mol/L硼砂组合最高，对雌虫、雄虫和雌雄总数的诱捕数量分别为3854.0、3805.7、7659.7只，对雌虫的诱捕数量，与20 g/L蛋白/0.03、0.06、0.09、0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.03、0.06、0.12mol/L硼砂组合之间差异不显著，极显著高于20 g/L蛋白不加硼砂对照和10、15 g/L蛋白硼砂各组合；对雄虫和雌雄总数，与20 g/L蛋白/0.06、0.09、0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.03、0.06、0.09 mol/L硼砂组合之间差异不显著，与20 g/L蛋白/0.03 mol/L硼砂组合差异显著，与10、15 g/L蛋白硼砂各组合及对照之间差异极显著。
2.2诱杀试验从表2可以看出，随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加，酶解蛋白硼砂组合对橘小实蝇的诱杀数量逐渐增加，以25 g/L蛋白/0.12 mol/L硼砂组合最高，对雌虫、雄虫和雌雄总数的诱杀数量分别为401.8000、387.4000、789.2000只，对雌虫，与20 g/L蛋白/0.09、0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.06、0.09 mol/L硼砂组合差异不显著，与20 g/L蛋白/0.06 mol/L硼砂组合间差异显著，与对照间差异极显著；对雄虫和雌雄总数，与20 g/L蛋白/0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.09、0.12 mol/L硼砂组合之间差异不显著，与20 g/L蛋白/0.09 mol/L硼砂组合之间差异显著，与20 g/L蛋白0.06 mol/L硼砂组合及对照之间差异极显著。
3结论与讨论
杜迎刚等[4，5]研究表明，啤酒废酵母酶解蛋白在浓度为20 g/L时引诱活性最强，所以本研究以不加硼砂的20 g/L啤酒废酵母酶解蛋白液为对照，比较不同浓度的酶解蛋白液加硼砂后对橘小实蝇的诱捕和诱杀效果。从表1可以看出，因为硼砂的加入使得15 g/L甚至更低浓度蛋白对橘小实蝇的诱捕效果与20 g/L的相当，这与单独施用蛋白诱剂相比节省了蛋白资源，但15 g/L剂量组与25 g/L剂量组间存在极显著差异，这说明要达到更好的田间诱捕效果，蛋白浓度最好高于15 g/L。试验过程中，所有组合均是对雌性的引诱数量高于雄性，但无显著差异，雌雄引诱数量的差异与田间橘小实蝇的生态状态也有很大关系[1，10]。在橘小实蝇诱捕试验中，25 g/L蛋白剂量组第1周引诱效果稍差，这与剂量太高导致挥发性物质浓度较高不利于橘小实蝇感应有关，此结果与杜迎刚[4，5]研究结果一致，第2周开始引诱数量增加；与此相反，10 g/L蛋白剂量组第1周引诱效果较好，第2周开始较差；15 、20 g/L剂量组在试验周期内引诱效果较平稳。诱杀试验中，各组合都是随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加诱杀效果增强，这与诱杀是在相对开放的环境中及福州雨季有关，这也是本试验只观察1周的原因。通过本研究，进一步精确了啤酒废酵母酶解蛋白的最佳田间使用浓度范围（20～25 g/L）和硼砂的添加量（0.06～0.12 mol/L），为该蛋白诱剂产品的开发及施用提供了理论依据。 啤酒废酵母酶解蛋白诱剂富含氨基酸、多肽、糖类等[7～9]，是夏季高温下极易腐败的物质，此外引诱的实蝇虫体因分离不及时也会很快腐烂，这些势必影响到蛋白诱剂的引诱效果。硼砂对啤酒废酵母酶解蛋白的增效作用可能与硼砂对引起蛋白酶解物及虫体腐败变质的微生物的杀灭抑制作用有关，具体机理有待进一步研究。
参考文献
[1]杜迎刚，陈家骅，季清娥. 一种新型蛋白诱剂对橘小实蝇引诱作用[J].福建林学院学报，2007，27（3）：259-262.
[2]杜迎刚，陈家骅，季清娥. 橘小实蝇个体食量研究[J].福建农林大学学报：自然科学版，2008，37（2）：122-126.
[3]杜迎刚，陈家骅，季清娥，等. 橘小实蝇对蛋白和糖的反应[J].福建农林大学学报：自然科学版，2007，36（4）：357-360.
[4]杜迎刚. 新型橘小实蝇引诱蛋白的研究[D].福建农林大学，2007.
[5]杜迎刚，李云玲，季清娥. 啤酒废酵母酶解生产橘小实蝇引诱蛋白研究[J].安徽农业科学，2012，40（3）：1479-1480，1482.
[6]Grant T M， Steven L P， Paul G B， et al. Comparative evaluation of spinosad and phloxine B as toxicants in protein baits for suppression of three fruit fly （Diptera： Tephritidae） species[J]. J. Econ. Entomol.， 2005，98（4）：1170-1178.
[7]张丽霞，张丽萍，于文革，等.啤酒酵母多糖的分离纯化与初步鉴定[J].安徽农业科学，2010，38（31）：17371-17372.
[8]王睦，金艳，张美硕，等.HPLC检测啤酒废酵母细胞中3种糖含量的方法研究[J].现代农业科技，2011，4：348，351.
[9]谭海刚，李静.从啤酒废酵母制取氨基酸工艺的研究[J].食品与药品，2008，10（11）：47-49.
[10]Robacker D C. Specific hunger in Anastrepha ludens （Diptera： Tephritidae）： Effects on attractiveness of proteinaceous and fruit-derived lures[J]. Environ. Entomol.，1991，20：1680-1686.
关键词：啤酒废酵母；硼砂；蛋白诱剂；增效作用；橘小实蝇
中图分类号：Q965.9：Q969.456.8 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2013）08-0110-03
橘小实蝇（Bactrocera dorsalis Hendel），属双翅目（Diptera）实蝇科（Tetriphitidae），是柑橘、阳桃、芒果、番石榴等250余种果树的毁灭性害虫[1～3]，蛋白诱杀是一项非常有效的防治措施。杜迎刚等用啤酒废酵母酶解制备出了在pH 8.5条件下对橘小实蝇具有很好引诱活性的蛋白诱剂[4，5]。本文对不同浓度啤酒废酵母酶解蛋白与硼砂组合后对橘小实蝇的田间诱捕和诱杀情况进行了研究，旨在为此蛋白的田间使用浓度范围及增效物质的研究提供依据。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1主要试剂木瓜蛋白酶（BR）：98万单位（北京双旋微生物培养基制品厂）；硼砂（AR）：安徽萧县化学试剂厂；蛋白诱剂：参照杜迎刚（2007）[4] 方法自制；杀虫介质：48%的Spinosad（多杀霉素）悬浮剂（美国陶氏益农公司）。
1.1.2仪器设备酸度计：PHS-3B（上海虹益仪器仪表有限公司）；电子天平：BS 124S（德国Sartorius）；移液器：德产Tripette；诱捕器：江苏常州禾丰生化研究所生产的橘小实蝇专用诱捕器。
1.2试验方法
1.2.1诱捕试验于福州武警福建总队食品生产基地及漳州热作所分别选择阳桃和番石榴园作为试验点。取新制备的啤酒废酵母酶解蛋白母液，稀释成不同浓度后加入不同浓度的硼砂溶液制成蛋白诱剂组合（具体组合见表1），以不加硼砂的20 g/L[1]啤酒废酵母酶解液为对照。每种诱剂组合重复12次，两地阳桃园、番石榴园各3次。每个诱捕器加一种供试溶液200 ml，挂于田间树上高1.5 m阴凉处。隔天统计引诱的雌雄实蝇数量并补水至200 ml，连续观察记录2周。
1.2.2诱杀试验棋盘式取样，选择周围环境和长势基本一致的株距20 m以上的番石榴28株，分7组。在树体离地面1.5 m处于叶背面喷硼砂与酶解蛋白诱剂组合50 ml（内加Spinosad 80 mg/L[1，6]；组合选择是在1.2.1试验的基础上，具体见表2），以不加硼砂的20 g/L蛋白诱剂为对照。每组4株分别喷4个方位，喷洒树体面积约1.5 m2，每株地面铺白色布，早晚各观察清理死虫1次，记录1周内引诱的雌雄橘小实蝇数量。
1.2.3数据分析方法数据处理用DPS v3.01统计分析软件，采用单因子方差分析对试验数据进行分析，方差检验用Duncan’s新复极差法进行。
2结果与分析
2.1诱捕试验从表1可以看出，随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加，酶解蛋白硼砂组合对橘小实蝇的诱捕数量逐渐增加，以25 g/L蛋白/0.09 mol/L硼砂组合最高，对雌虫、雄虫和雌雄总数的诱捕数量分别为3854.0、3805.7、7659.7只，对雌虫的诱捕数量，与20 g/L蛋白/0.03、0.06、0.09、0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.03、0.06、0.12mol/L硼砂组合之间差异不显著，极显著高于20 g/L蛋白不加硼砂对照和10、15 g/L蛋白硼砂各组合；对雄虫和雌雄总数，与20 g/L蛋白/0.06、0.09、0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.03、0.06、0.09 mol/L硼砂组合之间差异不显著，与20 g/L蛋白/0.03 mol/L硼砂组合差异显著，与10、15 g/L蛋白硼砂各组合及对照之间差异极显著。
2.2诱杀试验从表2可以看出，随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加，酶解蛋白硼砂组合对橘小实蝇的诱杀数量逐渐增加，以25 g/L蛋白/0.12 mol/L硼砂组合最高，对雌虫、雄虫和雌雄总数的诱杀数量分别为401.8000、387.4000、789.2000只，对雌虫，与20 g/L蛋白/0.09、0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.06、0.09 mol/L硼砂组合差异不显著，与20 g/L蛋白/0.06 mol/L硼砂组合间差异显著，与对照间差异极显著；对雄虫和雌雄总数，与20 g/L蛋白/0.12 mol/L硼砂组合和25 g/L蛋白/0.09、0.12 mol/L硼砂组合之间差异不显著，与20 g/L蛋白/0.09 mol/L硼砂组合之间差异显著，与20 g/L蛋白0.06 mol/L硼砂组合及对照之间差异极显著。
3结论与讨论
杜迎刚等[4，5]研究表明，啤酒废酵母酶解蛋白在浓度为20 g/L时引诱活性最强，所以本研究以不加硼砂的20 g/L啤酒废酵母酶解蛋白液为对照，比较不同浓度的酶解蛋白液加硼砂后对橘小实蝇的诱捕和诱杀效果。从表1可以看出，因为硼砂的加入使得15 g/L甚至更低浓度蛋白对橘小实蝇的诱捕效果与20 g/L的相当，这与单独施用蛋白诱剂相比节省了蛋白资源，但15 g/L剂量组与25 g/L剂量组间存在极显著差异，这说明要达到更好的田间诱捕效果，蛋白浓度最好高于15 g/L。试验过程中，所有组合均是对雌性的引诱数量高于雄性，但无显著差异，雌雄引诱数量的差异与田间橘小实蝇的生态状态也有很大关系[1，10]。在橘小实蝇诱捕试验中，25 g/L蛋白剂量组第1周引诱效果稍差，这与剂量太高导致挥发性物质浓度较高不利于橘小实蝇感应有关，此结果与杜迎刚[4，5]研究结果一致，第2周开始引诱数量增加；与此相反，10 g/L蛋白剂量组第1周引诱效果较好，第2周开始较差；15 、20 g/L剂量组在试验周期内引诱效果较平稳。诱杀试验中，各组合都是随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加诱杀效果增强，这与诱杀是在相对开放的环境中及福州雨季有关，这也是本试验只观察1周的原因。通过本研究，进一步精确了啤酒废酵母酶解蛋白的最佳田间使用浓度范围（20～25 g/L）和硼砂的添加量（0.06～0.12 mol/L），为该蛋白诱剂产品的开发及施用提供了理论依据。 啤酒废酵母酶解蛋白诱剂富含氨基酸、多肽、糖类等[7～9]，是夏季高温下极易腐败的物质，此外引诱的实蝇虫体因分离不及时也会很快腐烂，这些势必影响到蛋白诱剂的引诱效果。硼砂对啤酒废酵母酶解蛋白的增效作用可能与硼砂对引起蛋白酶解物及虫体腐败变质的微生物的杀灭抑制作用有关，具体机理有待进一步研究。
参考文献
[1]杜迎刚，陈家骅，季清娥. 一种新型蛋白诱剂对橘小实蝇引诱作用[J].福建林学院学报，2007，27（3）：259-262.
[2]杜迎刚，陈家骅，季清娥. 橘小实蝇个体食量研究[J].福建农林大学学报：自然科学版，2008，37（2）：122-126.
[3]杜迎刚，陈家骅，季清娥，等. 橘小实蝇对蛋白和糖的反应[J].福建农林大学学报：自然科学版，2007，36（4）：357-360.
[4]杜迎刚. 新型橘小实蝇引诱蛋白的研究[D].福建农林大学，2007.
[5]杜迎刚，李云玲，季清娥. 啤酒废酵母酶解生产橘小实蝇引诱蛋白研究[J].安徽农业科学，2012，40（3）：1479-1480，1482.
[6]Grant T M， Steven L P， Paul G B， et al. Comparative evaluation of spinosad and phloxine B as toxicants in protein baits for suppression of three fruit fly （Diptera： Tephritidae） species[J]. J. Econ. Entomol.， 2005，98（4）：1170-1178.
[7]张丽霞，张丽萍，于文革，等.啤酒酵母多糖的分离纯化与初步鉴定[J].安徽农业科学，2010，38（31）：17371-17372.
[8]王睦，金艳，张美硕，等.HPLC检测啤酒废酵母细胞中3种糖含量的方法研究[J].现代农业科技，2011，4：348，351.
[9]谭海刚，李静.从啤酒废酵母制取氨基酸工艺的研究[J].食品与药品，2008，10（11）：47-49.
[10]Robacker D C. Specific hunger in Anastrepha ludens （Diptera： Tephritidae）： Effects on attractiveness of proteinaceous and fruit-derived lures[J]. Environ. Entomol.，1991，20：1680-1686.