【摘 要】
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目的 制成以羟丁基壳聚糖(HBC)为壳,以巯基烷基化壳聚糖(TACS)包埋基因质粒为核的核壳结构,探讨其作为缓释基因载体的可行性.方法 TACS与增强型绿色荧光蛋白基因(pEGFP)以复凝聚法制成纳米微球作为核结构(TACS/pEGFP),然后与温敏性HBC混合包裹以及冷冻干燥合成羟丁基壳聚糖-巯基烷基化壳聚糖/pEGFP(HBC-TACS/pEGFP)核壳结构;利用动态光散射仪器、透射电镜对核及
【机 构】
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230022合肥,安徽医科大学第一附属医院整形外科,中国科技大学,中国科技大学,中国科技大学,230022合肥,安徽医科大学第一附属医院整形外科
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目的 制成以羟丁基壳聚糖(HBC)为壳,以巯基烷基化壳聚糖(TACS)包埋基因质粒为核的核壳结构,探讨其作为缓释基因载体的可行性.方法 TACS与增强型绿色荧光蛋白基因(pEGFP)以复凝聚法制成纳米微球作为核结构(TACS/pEGFP),然后与温敏性HBC混合包裹以及冷冻干燥合成羟丁基壳聚糖-巯基烷基化壳聚糖/pEGFP(HBC-TACS/pEGFP)核壳结构;利用动态光散射仪器、透射电镜对核及核壳结构进行表征.凝胶电泳实验检测复合基因纳米粒子对pEGFP的携载以及保护作用.对HEK293T细胞和小鼠的骨骼肌进行体外和体内转染,检测基因复合纳米粒能否作为缓释基因载体.结果 HBC-TACS/pEGFP纳米微球多呈球形,粒径为(317.6±55.9) nm,表面Zeta电位为(2.3 ±1.1) mV,可有效保护pEGFP免受DNase I的降解.在体外转染经流式细胞仪测定,HBC-TACS/pEGFP的基因转染率为(8.00±5.69)％,明显小于TACS/pEGFP[(37.66±5.18)％],差异有统计学意义(P＜0.01).但是在小鼠体内随着时间的推移,核壳结构组EGFP荧光蛋白表达量逐渐增加,第45天激光共聚焦显微镜下观察到HBC-TACS/pEGFP的荧光强度强于TACS/pEGFP.结论 HBC-TACS/pEGFP可以作为基因载体并且在体内有缓释基因,延长基因表达的作用。
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