【摘 要】
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目的研究慢病毒载体pGCL-GFP介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(CTGF-ShRNA)干扰质粒对低氧诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)CTGF表达、细胞增殖和胶原合成的影响。方法构
【机 构】
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四川大学华西医院临床药理研究所,四川大学华西医院呼吸内科,
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目的研究慢病毒载体pGCL-GFP介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(CTGF-ShRNA)干扰质粒对低氧诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)CTGF表达、细胞增殖和胶原合成的影响。方法构建并筛选CTGF-ShRNA干扰质粒,PCR鉴定阳性克隆,重组质粒转染后随机分为4组,正常(Control)组,低氧(Hypoxia)组,低氧+慢病毒空载体(Hypo+pGCL-GFP)组和低氧+CTGF-ShRNA(Hypo+CTGF-ShRNA)组,实时荧光定量PCR及Western blot分析4组CFs CTGF mRNA及蛋白的相对表达水平,WST-1试剂盒和羟脯氨酸检测试剂盒分别检测4组细胞增殖情况和培养基中的胶原含量。结果成功构建并筛选CTGF-shRNA。与Control组比较,Hypoxia组、Hypo+pGCL-GFP组、Hypo+CTGF-ShRNA组CTGFmRNA相对表达水平升高(P<0.05),CTGF蛋白相对表达水平升高(P<0.05),细胞增殖活跃(P<0.05),胶原合成升高(P<0.05)。与Hypoxia组和Hypo+pGCL-GFP组比较,Hypo+CTGF-ShRNA组低氧诱导的CFsCTGFmRNA表达被抑制(P<0.01),CTGF蛋白合成降低(P<0.01),细胞增殖被抑制(P<0.01),胶原合成减少(P<0.01)。结论 CTGF-ShRNA抑制低氧诱导的CFsCTGFmRNA表达和蛋白合成,抑制低氧诱导的CFs细胞增殖和胶原合成。
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