【摘 要】
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目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)基因转染对肝细胞缺血再灌注损伤的保护作用.方法 用Cre酶介导的loxP位点特异性重组的方法,构建HSP70腺病毒载体;体外转染人正
【机 构】
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苏州大学附属第一医院普外科,江苏省临床免疫学重点实验室
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目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)基因转染对肝细胞缺血再灌注损伤的保护作用.方法 用Cre酶介导的loxP位点特异性重组的方法,构建HSP70腺病毒载体;体外转染人正常肝细胞株,检测HSP70的表达水平;对照组(转染空载体组)、转染HSP70 24、48、72 h组细胞经缺氧再复氧处理后,分别对细胞的存活率进行检测分析.结果 重组产物经鉴定后为包含有HSP70全长序列的腺病毒载体,HSP70基因位于其CMV启动子控制之下,浓度为3.0×1010 pfu/ml,共2 ml.Ad.CMV-HSP70转染组细胞HSP70基因表达为阳性,对照组无表达;经缺氧再复氧处理后,Ad.CMV-HSP70处理组活力较对照组明显增强,死亡细胞明显减少.结论 Cre酶介导的loxP位点特异性重组是一种简单、高效的腺病毒载体构建方法,具有构建速度快、成功率高、准确率高等特点.
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