关岭牛MyoDI基因启动子报告质粒的构建及活性验证

来源 :基因组学与应用生物学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：xiaokeai

【摘要】

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为了克隆关岭牛MyoDI基因启动子并验证其启动活性，根据GenBank中牛的MyoDI基因序列设计PCR引物，用PCR技术扩增牛Mr。DI基因的启动子，构建重组克隆载体pUCmT-MyoDI；并通过PCR扩增

【作者】

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李飞许厚强陈伟陈祥刘敏桓聪聪

【机构】

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贵州大学生命科学学院,高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室

【出处】

：

基因组学与应用生物学

【发表日期】

：

2013年4期

【关键词】

：

MyoDⅠ基因启动子荧光素酶 C2C12 3T3-L1 MyoD I genes Promoter Luciferase C2C12 3T3-L1

【基金项目】

：

本研究由国家转基因生物新品种培育科技重大专项课题《牛组织特异性调控元件克隆和功能验证》（2011ZX0800.9004）、贵州省科技厅农业攻关计划《影响牛脂肪沉积组织特异性调控元件克隆和功能验证》（黔科NY字[201213008号1和贵州大学研究生创新基金（校农科2012007）项目共同资助

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为了克隆关岭牛MyoDI基因启动子并验证其启动活性，根据GenBank中牛的MyoDI基因序列设计PCR引物，用PCR技术扩增牛Mr。DI基因的启动子，构建重组克隆载体pUCmT-MyoDI；并通过PCR扩增、限制性酶切、测序及生物信息学分析对阳性克隆进行鉴定；构建报告质粒pGL3-MyoDI，并将其转染小鼠C2C12、3T3-L1细胞系，检测其24h后的双荧光素酶活性。实验结果获得了关岭牛MyoDI基因启动子，其序列长度为993bp，并成功构建了MyoDI启动子报告质粒；双荧光素酶活性检测表明pGL3-

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