【摘 要】
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【摘要】本研究方法是根据ROP2基因序列，设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物，扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm-T载体，鉴定正确后，再将重组子亚克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中，并进一步应用PCR、雙酶切、测序等鉴定其重组子的正确性，最终制备弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗 【关键词】弓形虫；ROP2；基因重组；核酸疫苗 1获取了弓形虫基因组DNA 弓形虫为本实验室保
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【摘要】本研究方法是根据ROP2基因序列，设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物，扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm-T载体，鉴定正确后，再将重组子亚克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中，并进一步应用PCR、雙酶切、测序等鉴定其重组子的正确性，最终制备弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗
【关键词】弓形虫；ROP2；基因重组；核酸疫苗
1获取了弓形虫基因组DNA
弓形虫为本实验室保种的RH株，将冰冻的弓形虫速殖子复苏后经腹腔感染昆明小鼠，3d后收集腹腔液，离心收集含弓形虫速殖子的沉淀物，用PBS洗涤3次，重悬于0.2ml含1%SDS的STE液中，补加蛋白酶K至0.1mg/ml，37°C消化过夜[1]；用等体积的饱和酚、饱和酚/氯仿、氯仿各抽提一次，冷无水乙醇沉淀DNA，然后再用75%乙醇沉淀离心一次，溶于TE中，-20°C冻存备用，获取的弓形虫基因组DNA大于10kb。
2设计合成PCR引物、扩增获取了ROP2基因片段
根据要求设计PCR扩增引物，上下游引物分别引入保护基（GCTC，CGAG）和EcoRI、HindIII酶切位点（AAGCTT，GAATTC），序列内含有起始密码子ATG。靶基因扩增片段位于ROP2基因序列的440-2125处，扩增长度约1.7kb。
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