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摘要 [目的]研究不同条件下辣蓼草乙醇提取物对玉米蚜的触杀活性。[方法]采用单因素试验和正交试验，研究不同浓度、温度和时间下辣蓼草提取物对玉米蚜的死亡率和校正死亡率。[结果]在提取物浓度100 mg/mL、温度25 ℃、时间36 h时，辣蓼草提取物对玉米蚜的触杀活性最高。提取物浓度对辣蓼草触杀活性影响最大，其次为温度和处理时间。[结论]该研究为开发以辣蓼草为原料的植物性杀虫剂提供理论依据。
关键词 辣蓼草；提取物；玉米蚜；触杀活性
中图分类号 S433.39 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2018）23-0109-02
Abstract [Objective]To study on contact toxicity activity of Polygonum hydropipe ethanol extract on Rhopalosiphum maidis under different conditions.[Method]Using single factor and orthogonal test，the mortality rate and adjusted mortality rate of Polygonum hydropipe ethanol extract on Rhopalosiphum maidis under different concentration，temperature and time was studied.[Result]Under concentration of 100 mg/mL，temperature 25 ℃，time 36 h，the contact toxicity activity of Polygonum hydropipe ethanol extract was the highest.Extract concentration was the key factor influencing the contact toxicity activity，followed by temperature and time rate.[Conclusion]The study provides theoretical basis for development of vegetable insecticide with Polygonum hydropipe as raw material.
Key words Polygonum hydropipe；Extract；Rhopalosiphum maidis；Contact toxicity activity
辣蓼草植株中含有蓼酸、蓼二醛、补身醇、缩蓼二醛、倍半萜单醛、异水蓼二醛、11-乙氧基肉桂酐、异水蓼醛内醋等物质[1]。研究表明[2]，辣蓼草植株内含有的昆虫驱避活性的化学基础成分为8，9-二醛基7，8位不饱和Drimane骨架。
玉米蚜[Rhopalosiphum maidis（Fitch）]为蚜科昆虫，世界性害虫，主要为害玉米、大麦、小麦等禾谷类农作物，其成、若蚜通过刺吸植物韧皮部汁液对农作物直接产生危害，同时也是玉米矮花叶病毒（MDMV）、玉米叶斑病毒（MMSV）、玉米花叶条纹病毒（MMSV）等植物病毒的传播载体，取食时分泌的蜜露分布于植物叶片表面，影响植物光合作用的同时还能引起煤污病[3-7]。植物性杀虫剂防治玉米蚜高效、作用机理多样、不易诱发病虫害抗药性、与环境相容性好、选择性高、对非靶标生物相对安全，已成为新型的无公害农药。鉴于此，笔者研究辣蓼草提取物在不同条件下对玉米蚜的触杀活性，以期为开发以辣蓼草为原料的新型植物杀虫剂提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
辣蓼草采自佳木斯杏林湖公园内，经佳木斯大学程海涛副教授鉴定为蓼科Polygonaceae辣蓼草。将辣蓼草置于低温处干燥，粉碎，过60目分样筛得到的粉末装入塑封袋内保存，备用。
1.2 方法
1.2.1 辣蓼草提取物的制备。
取辣蓼草粉末100.00 g，加入乙醇在50 ℃下恒温加热3 h后，抽滤，重复抽滤3次后，合并3次所得的滤液，将滤液浓缩成稠膏状后，用丙酮将稠膏稀释成不同浓度，备用。
1.2.2 触杀活性的测定。
将供试样品用吐温-80水溶液分别稀释成12.50、25.00、50.00、75.00、100.00 mg/mL，对照组为吐温-80水溶液稀释后的丙酮溶液。使用点滴法[8]，在玉米蚜前胸背板处分别点滴约1.00 μL供试液，然后将供试玉米蚜转入垫有保湿滤纸的培养皿中，饲喂新鲜玉米叶片，置于恒温培养箱，采用不同温度饲养。于处理不同时间后分别记录玉米蚜的死亡情况。每次30头，重复3次，按下列公式统计死亡率以及校正死亡率[9]。
死亡率=（死亡个体数/供试个体总数）×100%
校正死亡率=[（处理组死亡个体数-对照组死亡数）/（1-对照组死亡数）]×100%
1.2.2.1 触杀活性单因素试验。
触杀活性单因素试验包括乙醇提取物浓度、环境温度和饲养时间，乙醇提取物浓度（A）：12.50、25.00、50.00、75.00、100.00 mg/mL，环境温度（B）：15、20、25、30、35 ℃，处理时间（C）：6、12、24、36、48 h。每个影响因子均进行3次重复性试验，统计得出玉米蚜的死亡率、校正死亡率，并选用3次平均值作为试验参数，确定不同因素对试验的影响，筛选出试验条件及参数。
1.2.2.2 触杀活性正交试验。
为了使测定条件进一步优化，参考单因素试验结果，选取以提取物浓度（A）、环境温度（B）、处理时间（C）3个因素进行辣蓼草對玉米蚜触杀活性的正交试验，采用L9（3.3）进行正交试验（表1）。 2 结果与分析
2.1 单因素试验结果
2.1.1 提取物浓度对玉米蚜触杀活性的影响。
由表2可知，在处理时间24 h、环境温度20 ℃时，辣蓼草乙醇提取物浓度在12.50～100.00 mg/mL时对玉米蚜触杀作用一般，但校正死亡率与浓度成正比，当辣蓼草乙醇提取物浓度达100.00 mg/mL时，校正死亡率仅为67.66%。
2.1.2 饲养时间对玉米蚜触杀活性的影响。
由表3可知，在辣蓼草乙醇提取物浓度75.00 mg/mL、环境温度为20 ℃时，处理时间在6～48 h时，辣蓼草乙醇提取物玉米蚜触杀作用较低，校正死亡率与时间成正比，当处理时间达48 h时，校正死亡率仅为49.90%。
2.1.3 温度对玉米蚜触杀活性的影响。
由表4可知，在辣蓼草乙醇提取物浓度75.00 mg/mL、处理时间为24 h时，温度在15～35 ℃，辣蓼草乙醇提取物对玉米蚜触杀作用较弱，温度为20 ℃时，校正死亡率最高可达52.10%。环境温度大于25 ℃后，环境温度上升，校正死亡率反而降低。
2.2 正交试验结果
由表5可知，影响辣蓼草乙醇提取物对玉米蚜触杀活性的因素由高到低依次为A、B、C，对辣蓼草触杀活性影响最大的因素是乙醇提取物浓度，环境温度、处理时间对触杀活性影响较小，通过试验确定，在A3B3C2（乙醇提取物浓度100.00 mg/mL、环境温度25 ℃、处理时间36 h）条件下，辣蓼草的乙醇提取物对玉米蚜具有最强的触杀作用。
3 结论与讨论
该试验结果表明，辣蓼草提取物对玉米蚜具有良好的触杀活性，其作为植物性杀虫剂具有良好的开发前景。
影响辣蓼草对玉米蚜触杀活性的因素主要有提取物浓度、时间、温度等因素。通过正交试验得出，乙醇提取物浓度对其触杀活性影响最大，环境温度和处理时间对其触杀活性影响较小。辣蓼草乙醇提取物对玉米蚜触杀活性最高的条件：乙醇提取物浓度100.00 mg/mL、环境温度25 ℃、处理时间36 h。
植物性杀虫剂活性成分通常为来源于植物体的次生代谢产物，但由于植物次生物质种类多，结构复杂，该试验得到的对玉米蚜具有触杀活性的物质为一类混合物，辣蓼草杀虫活性单体物质和杀虫机理仍有待深入研究。此外，辣蓼草具有杀虫活性的物质对热不稳定，易受环境因素影响，提高其稳定性也是开发利用辣蓼草的关键。
参考文献
[1] 巩忠福，杨国林，严作廷，等.蓼属植物的化学成分与药理学活性研究进展[J].中草药，2002，33（1）：82-84.
[2] 严福顺，SCHOONHOVEN L M.大菜粉蝶幼虫外颚叶味觉感应器对蓼二醛的电生理反应[J].昆虫学报，1993，36（1）：1-7.
[3] WANG Y H，SU L，WU J X.Effect of temperature on the population increase of corn leaf aphid，Rhopalosiphum maidis[J].Entomological knowledge，2002，39（4）：277-280.
[4] 马占鸿，王海光.我国玉米矮花叶病流行原因剖析[J].中国科学基金，2002（1）：44-46.
[5] 李丽莉，王振营，何康来，等.转Bt基因抗虫玉米对玉米蚜种群增长的影响[J].应用生态学报，2007，18（5）：1077-1080.
[6] 赵玖华，尚佑芬，路兴波，等.田间蚜虫消长与玉米矮花葉病流行的相关性研究[J].山东农业科学，2003（1）：30-31.
[7] SO Y S，JI H C，BREWBAKER J L.Resistance to corn leaf aphid（Rhopalosiphum maidis Fitch）in tropical corn（Zea mays L.）[J].Euphytica，2010，172（3）：373-381.
[8] 高蓉，田暄，张兴.3种鬼臼毒类物质杀虫活性测试[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2001，29（1）：71-74.
[9] 邹玉，邵鸣，王涛，等.马齿苋提取物对玉米蚜的拒食活性[J].安徽农业科学，2016，44（31）：94-96.
关键词 辣蓼草；提取物；玉米蚜；触杀活性
中图分类号 S433.39 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2018）23-0109-02
Abstract [Objective]To study on contact toxicity activity of Polygonum hydropipe ethanol extract on Rhopalosiphum maidis under different conditions.[Method]Using single factor and orthogonal test，the mortality rate and adjusted mortality rate of Polygonum hydropipe ethanol extract on Rhopalosiphum maidis under different concentration，temperature and time was studied.[Result]Under concentration of 100 mg/mL，temperature 25 ℃，time 36 h，the contact toxicity activity of Polygonum hydropipe ethanol extract was the highest.Extract concentration was the key factor influencing the contact toxicity activity，followed by temperature and time rate.[Conclusion]The study provides theoretical basis for development of vegetable insecticide with Polygonum hydropipe as raw material.
Key words Polygonum hydropipe；Extract；Rhopalosiphum maidis；Contact toxicity activity
辣蓼草植株中含有蓼酸、蓼二醛、补身醇、缩蓼二醛、倍半萜单醛、异水蓼二醛、11-乙氧基肉桂酐、异水蓼醛内醋等物质[1]。研究表明[2]，辣蓼草植株内含有的昆虫驱避活性的化学基础成分为8，9-二醛基7，8位不饱和Drimane骨架。
玉米蚜[Rhopalosiphum maidis（Fitch）]为蚜科昆虫，世界性害虫，主要为害玉米、大麦、小麦等禾谷类农作物，其成、若蚜通过刺吸植物韧皮部汁液对农作物直接产生危害，同时也是玉米矮花叶病毒（MDMV）、玉米叶斑病毒（MMSV）、玉米花叶条纹病毒（MMSV）等植物病毒的传播载体，取食时分泌的蜜露分布于植物叶片表面，影响植物光合作用的同时还能引起煤污病[3-7]。植物性杀虫剂防治玉米蚜高效、作用机理多样、不易诱发病虫害抗药性、与环境相容性好、选择性高、对非靶标生物相对安全，已成为新型的无公害农药。鉴于此，笔者研究辣蓼草提取物在不同条件下对玉米蚜的触杀活性，以期为开发以辣蓼草为原料的新型植物杀虫剂提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
辣蓼草采自佳木斯杏林湖公园内，经佳木斯大学程海涛副教授鉴定为蓼科Polygonaceae辣蓼草。将辣蓼草置于低温处干燥，粉碎，过60目分样筛得到的粉末装入塑封袋内保存，备用。
1.2 方法
1.2.1 辣蓼草提取物的制备。
取辣蓼草粉末100.00 g，加入乙醇在50 ℃下恒温加热3 h后，抽滤，重复抽滤3次后，合并3次所得的滤液，将滤液浓缩成稠膏状后，用丙酮将稠膏稀释成不同浓度，备用。
1.2.2 触杀活性的测定。
将供试样品用吐温-80水溶液分别稀释成12.50、25.00、50.00、75.00、100.00 mg/mL，对照组为吐温-80水溶液稀释后的丙酮溶液。使用点滴法[8]，在玉米蚜前胸背板处分别点滴约1.00 μL供试液，然后将供试玉米蚜转入垫有保湿滤纸的培养皿中，饲喂新鲜玉米叶片，置于恒温培养箱，采用不同温度饲养。于处理不同时间后分别记录玉米蚜的死亡情况。每次30头，重复3次，按下列公式统计死亡率以及校正死亡率[9]。
死亡率=（死亡个体数/供试个体总数）×100%
校正死亡率=[（处理组死亡个体数-对照组死亡数）/（1-对照组死亡数）]×100%
1.2.2.1 触杀活性单因素试验。
触杀活性单因素试验包括乙醇提取物浓度、环境温度和饲养时间，乙醇提取物浓度（A）：12.50、25.00、50.00、75.00、100.00 mg/mL，环境温度（B）：15、20、25、30、35 ℃，处理时间（C）：6、12、24、36、48 h。每个影响因子均进行3次重复性试验，统计得出玉米蚜的死亡率、校正死亡率，并选用3次平均值作为试验参数，确定不同因素对试验的影响，筛选出试验条件及参数。
1.2.2.2 触杀活性正交试验。
为了使测定条件进一步优化，参考单因素试验结果，选取以提取物浓度（A）、环境温度（B）、处理时间（C）3个因素进行辣蓼草對玉米蚜触杀活性的正交试验，采用L9（3.3）进行正交试验（表1）。 2 结果与分析
2.1 单因素试验结果
2.1.1 提取物浓度对玉米蚜触杀活性的影响。
由表2可知，在处理时间24 h、环境温度20 ℃时，辣蓼草乙醇提取物浓度在12.50～100.00 mg/mL时对玉米蚜触杀作用一般，但校正死亡率与浓度成正比，当辣蓼草乙醇提取物浓度达100.00 mg/mL时，校正死亡率仅为67.66%。
2.1.2 饲养时间对玉米蚜触杀活性的影响。
由表3可知，在辣蓼草乙醇提取物浓度75.00 mg/mL、环境温度为20 ℃时，处理时间在6～48 h时，辣蓼草乙醇提取物玉米蚜触杀作用较低，校正死亡率与时间成正比，当处理时间达48 h时，校正死亡率仅为49.90%。
2.1.3 温度对玉米蚜触杀活性的影响。
由表4可知，在辣蓼草乙醇提取物浓度75.00 mg/mL、处理时间为24 h时，温度在15～35 ℃，辣蓼草乙醇提取物对玉米蚜触杀作用较弱，温度为20 ℃时，校正死亡率最高可达52.10%。环境温度大于25 ℃后，环境温度上升，校正死亡率反而降低。
2.2 正交试验结果
由表5可知，影响辣蓼草乙醇提取物对玉米蚜触杀活性的因素由高到低依次为A、B、C，对辣蓼草触杀活性影响最大的因素是乙醇提取物浓度，环境温度、处理时间对触杀活性影响较小，通过试验确定，在A3B3C2（乙醇提取物浓度100.00 mg/mL、环境温度25 ℃、处理时间36 h）条件下，辣蓼草的乙醇提取物对玉米蚜具有最强的触杀作用。
3 结论与讨论
该试验结果表明，辣蓼草提取物对玉米蚜具有良好的触杀活性，其作为植物性杀虫剂具有良好的开发前景。
影响辣蓼草对玉米蚜触杀活性的因素主要有提取物浓度、时间、温度等因素。通过正交试验得出，乙醇提取物浓度对其触杀活性影响最大，环境温度和处理时间对其触杀活性影响较小。辣蓼草乙醇提取物对玉米蚜触杀活性最高的条件：乙醇提取物浓度100.00 mg/mL、环境温度25 ℃、处理时间36 h。
植物性杀虫剂活性成分通常为来源于植物体的次生代谢产物，但由于植物次生物质种类多，结构复杂，该试验得到的对玉米蚜具有触杀活性的物质为一类混合物，辣蓼草杀虫活性单体物质和杀虫机理仍有待深入研究。此外，辣蓼草具有杀虫活性的物质对热不稳定，易受环境因素影响，提高其稳定性也是开发利用辣蓼草的关键。
参考文献
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[8] 高蓉，田暄，张兴.3种鬼臼毒类物质杀虫活性测试[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2001，29（1）：71-74.
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