【摘 要】
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目的 构建过表达miR-126基因的结肠癌LOVO重组细胞系,观察miR-126在体外对该细胞增殖、转移的影响. 方法 用慢病毒lv-has-miR-126感染LOVO细胞,采用流式细胞术检测表达绿色荧
【机 构】
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南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所,广东广州,510515
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目的 构建过表达miR-126基因的结肠癌LOVO重组细胞系,观察miR-126在体外对该细胞增殖、转移的影响. 方法 用慢病毒lv-has-miR-126感染LOVO细胞,采用流式细胞术检测表达绿色荧光蛋白的细胞并进行RT-PCR鉴定;采用CCK-8试验和平板克隆形成试验检测细胞在体外的增殖情况,采用transwell试验检测细胞在体外的转移情况. 结果 用慢病毒感染LOVO细胞,流式细胞仪检测绿色荧光蛋白的表达量(感染率＞75％),Real-Time定量PCR检测结果表明,高表达组细胞中miR-126的表达量明显升高,而VEGF表达量下降,干扰组细胞中miR-126的表达量明显降低,VEGF表达量上升(P＜0.05).提示成功构建了稳定高表达的miR-126的结肠癌细胞株.体外CCK8增值实验及平板克隆形成试验显示miR-126上调后细胞生长及克隆数较对照组无显著差异(P＞0.05),体外迁移和侵袭实验证实高表达miR-126的LOVO细胞中,其细胞迁移和侵袭的细胞数目明显对于对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).可见miR-126在体外促进了LOVO细胞的转移. 结论 成功构建了高表达miR-126的LOVO重组细胞系,初步证实miR-126在体外对LOVO细胞的转移有促进作用.
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