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摘要[目的]研究西地碘粉对小鼠的经口急性毒性。[方法]选用清洁级ICR小鼠60只，采用寇氏法进行急性毒性试验，观察小鼠西地碘粉急性中毒症状，并测定西地碘粉经口给药对小鼠的LD50。[结果]小鼠经口给药后的急性中毒症状主要包括：给药后15 min，高剂量组小鼠出现精神沉郁，被毛粗乱无光，并逐渐转入抑制，反应迟钝、不食、麻痹。0.5～1.0 h后有小鼠出现呼吸困难，伴随脖颈伸直、食欲废绝；3 h后开始出现死亡，小鼠死亡前出现惊厥、抽搐、震颤等神经症状。急性死亡发生于给药后3～24 h。中毒死亡后剖检发现中毒症状主要表现为对肝脏的损伤，其次是肺和心脏。根据各剂量组死亡率，计算出西地碘粉对小鼠的急性经口LD50为4 972.75 mg/kg.，其LD50 95%可信限为4 382.77～5 642.16 mg/kg。[结论]西地碘粉对小鼠的经口LD50介于501～5 000 mg/kg，属于低毒性药物。
关键词西地碘粉；小鼠；LD50
中图分类号S851.36文献标识码
A文章编号0517-6611（2017）10-0104-02
Study on the Acute Toxicity of Cydiodine Powder
LI Guiming1，2，LIN Shuqian1，YANG Shifa1，SONG Minxun1* et al （1.Poultry Institute， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan， Shandong 250023； 2.Shandong HaoTai Technology Pharmaceutical Co.， Ltd.， Jinan， Shandong 250023）
Abstract[Objective] To study the oral acute toxicity of cydiodine powder on mice.[Method] 60 cleanlevel ICR mice were selected to make acute toxicity test by using Korbor method.The acute toxicity symptoms of cydiodine powder on mice were observed， and its LD50 on mice by oral administration was determined.[Result]The acute toxicity symptoms of cydiodine powder on mice were as follows： after drug administration 15 min， mice in highdose group had depressed spirit， disordered clothing hair， slow response， paralysis and loss of appetite； After drug administration 0.5-1.0 h， mice had difficult breathing， accompanied by straight neck and loss of appetite； After drug administration 3 h， mice began to die and eclampsia， convulsion， tremor and other neural symptoms appeared before the death of mice.And the acute death occurred after drug administration 3-24 h.It was observed through autopsy that the main manifestation of poisoning symptoms was the damage to liver， followed by the damage to lung and heart.According to the death rate in each dose group， the acute oral LD50 of cydiodine powder on mice was 4 972.75 mg/kg， 95% confidence limit of LD50 was 4 382.77-5 642.16 mg/kg.[Conclusion]The oral LD50 of cydiodine powder on mice was between 501-5 000 mg/kg， belonging to low-toxicity drug.
Key wordsCydiodine powder；Mice；LD50
在众多的消毒剂中，碘制剂因其消毒效果好、毒副作用低、刺激性小、无残留[1-2]以及无生态毒性等优点而被广泛应用。其中，聚维酮碘和季铵盐碘目前已在临床上广泛使用[3]。但是，有机络合碘制品有效碘释放率较低、环境消毒成本高，制约了其在兽医临床上的推广应用[4]。西地碘粉是山东省农业科学院与山东昊泰科技药业有限公司于2010年研发的具有超分子结构的消毒剂，具有有效碘含量高、质量稳定等优点。笔者选用60只清洁级ICR小鼠，采用寇氏法进行了西地碘粉的急性毒性研究。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1实验动物。
清洁级健康ICR小鼠60只，体重18～22 g，雌雄各半，由扬州大学比较医学中心提供，实验动物生产许可证号为SCXK（苏）2012-0004，实验动物使用许可证号为SYXK（苏）2012-0029。小鼠饲喂经60Co照射的饲料，自由采食和饮水，饮用水为符合城市饮用水标准的自来水。试验前在实验动物房环境中适应饲养3 d，经口给药前停饲12 h，不限制飲水。 小鼠饲粮的主要营养水平如下：水分≤10%，粗蛋白≥18%，粗脂肪≥4%，粗纤维≥5%，粗灰分≤8%，钙1.0%～1.8%，磷0.6%～1.2%。
1.1.2受试药物及溶液配制。
受试药物为西地碘粉，批号为20150701，由山东省农业科学院家禽研究所提供。临用前用超纯水配制成所需浓度的溶液。
1.1.3受试药物的给药方法。
给药途径为经口给药，小鼠给予受试药物用量为0.02 mL/g。给药前禁饲12 h，不限制饮水，给药后3 h饲喂。
1.2试验方法 采用寇氏（Korbor）法[5]进行急性毒性试验。
1.2.1预试验。每组4只小鼠（雌雄各半）进行预试验，测定4/4致死剂量（b）和0/4致死剂量（a）。通过预试验测得受试药物对小鼠的0/4致死剂量为3 000 mg/kg，4/4致死剂量为9 000 mg/kg。
1.2.2正式试验。
1.2.2.1实验动物的称重、标记、编号和分组。
清洁级健康ICR小鼠60只，采用完全随机法分为6组，每组10只，雌雄各半，雄、雌动物分开进行正式试验，分别对雄、雌小鼠进行编号、标记及称重。
1.2.2.2受试药物溶液的配制。
按“1：K系列稀释法”等容量配制各剂量组所需的受试药物溶液，根据设计的试验剂量，按实验动物给予受试药物的体积要求，首先确定最大剂量组所需配制的受试药物溶液浓度C1（150 mg/mL）以及各剂量组所需受试药物溶液的体积m（6 mL）。
受试药物母液应配制的浓度C为150 mg/mL，配制的体积M（mL）按下列公式进行计算：
M=m1-K=6/（1-1/1.25） =30.42（mL）
式中，K为各组剂量的比值，K=1/r。
根据母液浓度及体积，计算需称取的受试药物量为4 562.54 mg。
称取受试药物562.54 mg，置于烧杯内，加入选定的溶剂溶解，转入容量瓶内，充分混匀并定容，即获得浓度C=C1的受试物母液。从受试物母液中取出供最大剂量组给药用的溶液体积m，向原溶液中加入同体积的溶剂，混匀后溶液浓度为C1×K，正好是次高剂量组所要求的剂量浓度C2；从中取出供第2组给药用的溶液体积m，再加入相同体积的溶剂，混匀后溶液浓度为C2×K，正好是第3组所要求的剂量浓度C3，依此类推，配制出各剂量组所需浓度及体积的受试药物溶液。
1～6组受试药物的经口给药剂量依次为3 000.00、3 737.19、4 655.54、5 799.55、7 224.67和9 000.00 mg/kg。
1.2.2.3给药方法。根据各组小鼠体重，计算应给予受试药物的体积。按照“1.1.3”方法经口给予受试药物。
1.2.2.4症状观察。给药结束后，每天2次观察小鼠的一般状况，包括体重、精神状态、毛色、自主活动、呼吸、饮食欲、粪便、口鼻分泌物、中毒症状和死亡情况。对观察期间死亡小鼠进行大体解剖学检查，并记录全部大体病理变化，连续观察14 d。试验结束后将存活小鼠处死，观察剖检症状。
1.2.3数据计算。采用寇氏法按照以下公式计算LD50及其95%可信限：
LD50=log-1[Xm-i（p-0.05）]
当不含0%和100%死亡率时，按照以下公式计算LD50：
LD50=log-1[Xm-i（p-3-Pm-Pn4）]
Sx50=ipqn
LD50 的95%可信限=log-1（logLD50±1.96×Sx50）
式中，i为组距，即相邻2组剂量对数剂量之差；Xm为最大剂量对数；P为各剂量组死亡率（死亡率均用小数表示）；
Pm为最高死亡率；q为各组剂量存活率，q=1-p；Pn为最低死亡率；∑p为各剂量组死亡率之和；
n为各组動物数；Sx50为logLD50的标准误。
2结果与分析
2.1中毒症状
小鼠经口给药后30 min，高剂量组小鼠出现精神沉郁，被毛粗乱无光，并逐渐转入抑制，反应迟钝、不食、麻痹，紫绀。1.5 h后有小鼠出现呼吸困难伴随脖颈伸直、食欲废绝，3 h后开始出现死亡，小鼠死亡前出现惊厥、抽搐、震颤等神经症状。急性死亡发生于给药后3～24 h。中毒死亡后进行剖检，中毒症状主要表现为对肝脏的损伤，其次是肺和心脏。肝脏的主要变化包括表面有出血点、淤血、水肿和呈黄褐色等，肺的主要病理变化为表面淤血水肿等，心脏的主要病变为心肌颜色变淡。
2.2急性经口LD50
急性毒性试验是指1 d内对动物单次或多次给药，连续观察给药后动物产生的毒性反应及死亡情况的试验方法。经口（注射）一次性或24 h内多次给予受试药物后，在短时间内观察实验动物所产生的毒性反应，引起半数致死的剂量称为半数致死剂量，通常用LD50表示。通过试验测得受试药物对小鼠的急性经口LD50为4 972.75 mg/kg，其LD50 95%可信限为4 382.77～5 642.16 mg/kg。由此可见，受试药物对小鼠的经口LD50介于501～5 000 mg/kg，属于低毒。
柳占彪等[8]对碘伏的毒性进行了研究，结果小鼠的LD50大于5 000 mg/kg，属于实际无毒。蓄积系数均大于5，为弱蓄积作用。慢性毒性试验的最大无作用剂量为1 000 mg/kg。根据动物的急毒试验和慢性积蓄性毒理试验结果，可以看出活性碘的安全性以及潜在的开发价值，尤其在慢性积蓄毒理试验过程中无机碘和活性碘同样未表现出对肝、肾、睾丸等的直接毒性结果[9]。碘的使用浓度为50 mg/L，按畜禽最小体重（雏鸡） 50 g计算，需灌服5 L才能达到LD50；按成年人50 kg体重计算，需口服24.86 kg才能达到LD50，由此可见其在临床用量中安全无毒。
3结论
小鼠经口给药后的急性中毒症状主要包括：给药后15 min，高剂量组小鼠出现精神沉郁，被毛粗乱无光，并逐渐转入抑制，反应迟钝、不食、麻痹。0.5～1.0 h后有小鼠出现呼吸困难伴随脖颈伸直、食欲废绝，3h后开始出现死亡，小鼠
关键词西地碘粉；小鼠；LD50
中图分类号S851.36文献标识码
A文章编号0517-6611（2017）10-0104-02
Study on the Acute Toxicity of Cydiodine Powder
LI Guiming1，2，LIN Shuqian1，YANG Shifa1，SONG Minxun1* et al （1.Poultry Institute， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan， Shandong 250023； 2.Shandong HaoTai Technology Pharmaceutical Co.， Ltd.， Jinan， Shandong 250023）
Abstract[Objective] To study the oral acute toxicity of cydiodine powder on mice.[Method] 60 cleanlevel ICR mice were selected to make acute toxicity test by using Korbor method.The acute toxicity symptoms of cydiodine powder on mice were observed， and its LD50 on mice by oral administration was determined.[Result]The acute toxicity symptoms of cydiodine powder on mice were as follows： after drug administration 15 min， mice in highdose group had depressed spirit， disordered clothing hair， slow response， paralysis and loss of appetite； After drug administration 0.5-1.0 h， mice had difficult breathing， accompanied by straight neck and loss of appetite； After drug administration 3 h， mice began to die and eclampsia， convulsion， tremor and other neural symptoms appeared before the death of mice.And the acute death occurred after drug administration 3-24 h.It was observed through autopsy that the main manifestation of poisoning symptoms was the damage to liver， followed by the damage to lung and heart.According to the death rate in each dose group， the acute oral LD50 of cydiodine powder on mice was 4 972.75 mg/kg， 95% confidence limit of LD50 was 4 382.77-5 642.16 mg/kg.[Conclusion]The oral LD50 of cydiodine powder on mice was between 501-5 000 mg/kg， belonging to low-toxicity drug.
Key wordsCydiodine powder；Mice；LD50
在众多的消毒剂中，碘制剂因其消毒效果好、毒副作用低、刺激性小、无残留[1-2]以及无生态毒性等优点而被广泛应用。其中，聚维酮碘和季铵盐碘目前已在临床上广泛使用[3]。但是，有机络合碘制品有效碘释放率较低、环境消毒成本高，制约了其在兽医临床上的推广应用[4]。西地碘粉是山东省农业科学院与山东昊泰科技药业有限公司于2010年研发的具有超分子结构的消毒剂，具有有效碘含量高、质量稳定等优点。笔者选用60只清洁级ICR小鼠，采用寇氏法进行了西地碘粉的急性毒性研究。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1实验动物。
清洁级健康ICR小鼠60只，体重18～22 g，雌雄各半，由扬州大学比较医学中心提供，实验动物生产许可证号为SCXK（苏）2012-0004，实验动物使用许可证号为SYXK（苏）2012-0029。小鼠饲喂经60Co照射的饲料，自由采食和饮水，饮用水为符合城市饮用水标准的自来水。试验前在实验动物房环境中适应饲养3 d，经口给药前停饲12 h，不限制飲水。 小鼠饲粮的主要营养水平如下：水分≤10%，粗蛋白≥18%，粗脂肪≥4%，粗纤维≥5%，粗灰分≤8%，钙1.0%～1.8%，磷0.6%～1.2%。
1.1.2受试药物及溶液配制。
受试药物为西地碘粉，批号为20150701，由山东省农业科学院家禽研究所提供。临用前用超纯水配制成所需浓度的溶液。
1.1.3受试药物的给药方法。
给药途径为经口给药，小鼠给予受试药物用量为0.02 mL/g。给药前禁饲12 h，不限制饮水，给药后3 h饲喂。
1.2试验方法 采用寇氏（Korbor）法[5]进行急性毒性试验。
1.2.1预试验。每组4只小鼠（雌雄各半）进行预试验，测定4/4致死剂量（b）和0/4致死剂量（a）。通过预试验测得受试药物对小鼠的0/4致死剂量为3 000 mg/kg，4/4致死剂量为9 000 mg/kg。
1.2.2正式试验。
1.2.2.1实验动物的称重、标记、编号和分组。
清洁级健康ICR小鼠60只，采用完全随机法分为6组，每组10只，雌雄各半，雄、雌动物分开进行正式试验，分别对雄、雌小鼠进行编号、标记及称重。
1.2.2.2受试药物溶液的配制。
按“1：K系列稀释法”等容量配制各剂量组所需的受试药物溶液，根据设计的试验剂量，按实验动物给予受试药物的体积要求，首先确定最大剂量组所需配制的受试药物溶液浓度C1（150 mg/mL）以及各剂量组所需受试药物溶液的体积m（6 mL）。
受试药物母液应配制的浓度C为150 mg/mL，配制的体积M（mL）按下列公式进行计算：
M=m1-K=6/（1-1/1.25） =30.42（mL）
式中，K为各组剂量的比值，K=1/r。
根据母液浓度及体积，计算需称取的受试药物量为4 562.54 mg。
称取受试药物562.54 mg，置于烧杯内，加入选定的溶剂溶解，转入容量瓶内，充分混匀并定容，即获得浓度C=C1的受试物母液。从受试物母液中取出供最大剂量组给药用的溶液体积m，向原溶液中加入同体积的溶剂，混匀后溶液浓度为C1×K，正好是次高剂量组所要求的剂量浓度C2；从中取出供第2组给药用的溶液体积m，再加入相同体积的溶剂，混匀后溶液浓度为C2×K，正好是第3组所要求的剂量浓度C3，依此类推，配制出各剂量组所需浓度及体积的受试药物溶液。
1～6组受试药物的经口给药剂量依次为3 000.00、3 737.19、4 655.54、5 799.55、7 224.67和9 000.00 mg/kg。
1.2.2.3给药方法。根据各组小鼠体重，计算应给予受试药物的体积。按照“1.1.3”方法经口给予受试药物。
1.2.2.4症状观察。给药结束后，每天2次观察小鼠的一般状况，包括体重、精神状态、毛色、自主活动、呼吸、饮食欲、粪便、口鼻分泌物、中毒症状和死亡情况。对观察期间死亡小鼠进行大体解剖学检查，并记录全部大体病理变化，连续观察14 d。试验结束后将存活小鼠处死，观察剖检症状。
1.2.3数据计算。采用寇氏法按照以下公式计算LD50及其95%可信限：
LD50=log-1[Xm-i（p-0.05）]
当不含0%和100%死亡率时，按照以下公式计算LD50：
LD50=log-1[Xm-i（p-3-Pm-Pn4）]
Sx50=ipqn
LD50 的95%可信限=log-1（logLD50±1.96×Sx50）
式中，i为组距，即相邻2组剂量对数剂量之差；Xm为最大剂量对数；P为各剂量组死亡率（死亡率均用小数表示）；
Pm为最高死亡率；q为各组剂量存活率，q=1-p；Pn为最低死亡率；∑p为各剂量组死亡率之和；
n为各组動物数；Sx50为logLD50的标准误。
2结果与分析
2.1中毒症状
小鼠经口给药后30 min，高剂量组小鼠出现精神沉郁，被毛粗乱无光，并逐渐转入抑制，反应迟钝、不食、麻痹，紫绀。1.5 h后有小鼠出现呼吸困难伴随脖颈伸直、食欲废绝，3 h后开始出现死亡，小鼠死亡前出现惊厥、抽搐、震颤等神经症状。急性死亡发生于给药后3～24 h。中毒死亡后进行剖检，中毒症状主要表现为对肝脏的损伤，其次是肺和心脏。肝脏的主要变化包括表面有出血点、淤血、水肿和呈黄褐色等，肺的主要病理变化为表面淤血水肿等，心脏的主要病变为心肌颜色变淡。
2.2急性经口LD50
急性毒性试验是指1 d内对动物单次或多次给药，连续观察给药后动物产生的毒性反应及死亡情况的试验方法。经口（注射）一次性或24 h内多次给予受试药物后，在短时间内观察实验动物所产生的毒性反应，引起半数致死的剂量称为半数致死剂量，通常用LD50表示。通过试验测得受试药物对小鼠的急性经口LD50为4 972.75 mg/kg，其LD50 95%可信限为4 382.77～5 642.16 mg/kg。由此可见，受试药物对小鼠的经口LD50介于501～5 000 mg/kg，属于低毒。
柳占彪等[8]对碘伏的毒性进行了研究，结果小鼠的LD50大于5 000 mg/kg，属于实际无毒。蓄积系数均大于5，为弱蓄积作用。慢性毒性试验的最大无作用剂量为1 000 mg/kg。根据动物的急毒试验和慢性积蓄性毒理试验结果，可以看出活性碘的安全性以及潜在的开发价值，尤其在慢性积蓄毒理试验过程中无机碘和活性碘同样未表现出对肝、肾、睾丸等的直接毒性结果[9]。碘的使用浓度为50 mg/L，按畜禽最小体重（雏鸡） 50 g计算，需灌服5 L才能达到LD50；按成年人50 kg体重计算，需口服24.86 kg才能达到LD50，由此可见其在临床用量中安全无毒。
3结论
小鼠经口给药后的急性中毒症状主要包括：给药后15 min，高剂量组小鼠出现精神沉郁，被毛粗乱无光，并逐渐转入抑制，反应迟钝、不食、麻痹。0.5～1.0 h后有小鼠出现呼吸困难伴随脖颈伸直、食欲废绝，3h后开始出现死亡，小鼠