【摘 要】
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目的 建立猪诱导多能干细胞(pj PSCs)系,优化培养条件.方法 猪皮肤成纤维细胞(PF)经慢病毒介导表达人多能性因子Oct4(hOct4)、人性别决定区Y框蛋白2(hSox2)、人Kruppel样因子4(hKlf4)和hc-Myc,诱导成为piPSCs,挑选克隆培养于piPSCs培养基中,观察piPSCs生长状态；免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测piPSCs多能性基因表达
【机 构】
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210029南京医科大学第一附属医院肝脏外科江苏省肝脏外科研究所,210029南京医科大学第一附属医院肝脏外科江苏省肝脏外科研究所,210029南京医科大学第一附属医院肝脏外科江苏省肝脏外科研究所,2
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目的 建立猪诱导多能干细胞(pj PSCs)系,优化培养条件.方法 猪皮肤成纤维细胞(PF)经慢病毒介导表达人多能性因子Oct4(hOct4)、人性别决定区Y框蛋白2(hSox2)、人Kruppel样因子4(hKlf4)和hc-Myc,诱导成为piPSCs,挑选克隆培养于piPSCs培养基中,观察piPSCs生长状态；免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测piPSCs多能性基因表达；观察拟胚体(EB)、畸胎瘤形成能力.结果 piPSCs呈典型的克隆状生长,克隆呈圆形或椭圆形,边界清晰.克隆内细胞排列紧密.细胞体积小,核大,细胞核/质比高；piPSCs高表达人多能性基因,以转染2d后基因表达水平为标准值1,hOct4、hc-Myc、hSox2、hKlf4的相对表达水平分别为1.14、0.89、0.74和0.86,而PF几乎不表达这些人源性基因；piPSCs也高表达猪多能性标记Sox2 (pSox2)、pNanog和pLin28(以转染2d后基因表达水平为标准值1,相对表达水平分别为29.62、2.81、7.46)；piPSCs还表达碱性磷酸酶(ALP)活性；体外悬浮培养能形成EB；接种体内能形成畸胎瘤.结论 成功获得piPSCs系,能稳定增殖,保持自我更新及多向分化潜能。
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