【摘 要】
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目的:在大肠杆菌中表达苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒P6.9蛋白并制备抗体,研究P6.9的自身互作.方法:用PCR方法扩增p6.9基因,将其分别克隆到原核表达载体pMAL - c2x、pGEX -4T-1、
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目的:在大肠杆菌中表达苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒P6.9蛋白并制备抗体,研究P6.9的自身互作.方法:用PCR方法扩增p6.9基因,将其分别克隆到原核表达载体pMAL - c2x、pGEX -4T-1、pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.选取可溶性较好的融合蛋白纯化后免疫家兔制备抗体.然后利用该抗体进行Western blot检测、分析P6.9的自身互作.结果:构建了pMAL-P6.9、pGEX -P6.9、pET-P6.9三种原核表达质粒,分别在大肠杆菌中经IPTG诱导表达产生了与预期分子量相符的MBP-P6.9(49.4kDa)、GST-P6.9 (32.9kDa)、HIS-P6.9 (12.5kDa)融合蛋白.制备了P6.9的多克隆抗体,能与P6.9蛋白发生特异反应.Pull - down结果表明P6.9自身互作.结论:获得了兔抗P6.9的多克隆抗体,为深入研究P6.9的功能提供了检测工具.证明了P6.9之间的互作,说明该蛋白功能的发挥可能是通过多聚体起作用的.
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